研究目的
通过结合质心估计和照明模式诱导的光子计数变化，提高大视场下单分子定位显微镜的精度。
研究成果
SIMFLUX方法在定位精度上比标准方法提升了近两倍，兼容相机上的标准宽场成像，并克服了MINFLUX视野有限和通量不足的问题。
研究不足
该方法对强度波动的敏感性，以及对高调制深度和精确图案相位估计的要求。
1：实验设计与方法选择：
搭建定制化全内反射结构光照明显微镜以实现SIMFLUX方法，结合质心估计与照明图案诱导的光子计数变化。
2：样本选择与数据来源：
采用DNA-PAINT和STORM成像技术对DNA折纸纳米结构及细胞内的微管蛋白进行成像。
3：实验设备与材料清单：
使用200毫瓦640纳米二极管激光器、sCMOS相机、普克尔盒、压电载物台及定制蚀刻二元相位光栅。
4：实验流程与操作步骤：
该系统通过快速切换两个正交线状图案，在毫秒级时间尺度上循环六种图案。
5：数据分析方法：
处理流程包含偏移量与增益校正、感兴趣区域识别、最大似然估计拟合以及照明图案参数的迭代优化。
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获取完整内容-
sCMOS camera
ORCA Flash 4.0V2
Hamamatsu
Captures the fluorescence images for analysis.
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piezoelectric stages
P-753.1CD
PI
Phase shifts the binary phase gratings for pattern generation.
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diode laser
CLUP-640
Toptica
Provides the illumination source for the microscopy setup.
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Pockels cell
EM508-2T-F-AR640
Leysop
Switches the laser between two beam paths for generating interference patterns.
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binary phase gratings
DS-281-1-Y-A
HOLOOR
Generates diffraction orders for interference based sinusoidal illumination patterns.
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