研究目的
开发一种使用短PEG连接体将酶共价连接到等离激元纳米颗粒上的稳健通用方案，在保持蛋白质活性和胶体稳定性的同时，定量控制每个颗粒上的酶数量。
研究成果
开发了一种通用方法，通过短PEG连接剂和Tween20实现酶与等离子体纳米颗粒的定量偶联并保持稳定性。该方法可控制每个颗粒上的酶数量并维持酶活性，为传感、诊断和药物递送应用铺平了道路。
研究不足
该协议的有效性可能因不同的纳米粒子和酶组合而异。每个颗粒上酶的最大数量受限于酶的物理尺寸和纳米粒子上的可用表面积。
1：实验设计与方法选择：
该方案包括用混合的SH-PEG-生物素和SH-PEG-甲基溶液对纳米颗粒进行聚乙二醇化处理，随后在含Tween20的缓冲液中与链霉亲和素偶联酶进行结合。
2：样本选择与数据来源：
使用了具有不同表面配体和ζ电位的金纳米球、金纳米棒和银纳米球。
3：实验设备与材料清单：
紫外-可见分光光度计、Fluoroskan Ascent FL酶标仪、透射电子显微镜、SH-PEG-生物素、SH-PEG-甲基、Tween20、酶（碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶）。
4：酶（碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶）。 实验步骤与操作流程：
4. 实验步骤与操作流程：对纳米颗粒进行聚乙二醇化处理，与酶结合，并通过离心法纯化。使用荧光底物测定酶浓度。
5：数据分析方法：
基于米氏动力学假设，根据酶反应的初始速度确定酶浓度。
独家科研数据包，助您复现前沿成果，加速创新突破
获取完整内容-
UV-VIS spectrophotometer
Shimadzu 2600
Shimadzu
Measuring the extinction spectra of nanoparticle suspensions
-
SH-PEG-methyl
800 Da
Sigma-Aldrich
PEGylation of nanoparticles
-
Fluoroskan Ascent FL well plate reader
Thermo?sher
Reading out the fluorogenic enzymatic reactions from 96-well plates
-
Transmission electron microscope
Visualizing the nanoparticles
-
SH-PEG-biotin
1 kDa
Nanocs
PEGylation of nanoparticles
-
Tween20
Stabilizing agent for nanoparticles
-
Alkaline phosphatase
Sigma-Aldrich
Enzyme for conjugation
-
β-galactosidase
Sigma-Aldrich
Enzyme for conjugation
-
Horseradish peroxidase
Sigma-Aldrich
Enzyme for conjugation
-
登录查看剩余7件设备及参数对照表
查看全部
