研究目的
探索通过光控核酸酶失活的Cas9（dCas9）核定位，在酿酒酵母中生成基因表达光遗传学抑制因子的可能性。
研究成果
所开发的工具包可用于酿酒酵母中基因表达的时空扰动。该方案的简便性使得这些阻遏蛋白能够被轻松改造，从而控制医学相关真菌（如致病酵母）的基因表达。
研究不足
所实现的光诱导抑制效果相对较弱（最高达2倍）。基础抑制作用以及现有Tef1-GFP蛋白的稀释时间，导致了这种较低水平的光诱导抑制。
1：实验设计与方法选择：
利用dCas9、哺乳动物转录抑制因子Mxi1以及光遗传学工具LINuS（用于调控核定位）作为现有酵母光遗传学工具包的组成部分。
2：哺乳动物转录抑制因子Mxi1以及光遗传学工具LINuS（用于调控核定位）作为现有酵母光遗传学工具包的组成部分。 样本选择与数据来源：
2. 样本选择与数据来源：使用携带TEF1-GFP和TEF1-mCherry报告基因的酿酒酵母菌株。
3：实验设备与材料清单：
光板装置（LPA）、流式细胞仪（BD LSRII多激光分析仪、Attune NxT流式细胞仪）、尼康Eclipse-TI倒置显微镜。
4：实验步骤与操作流程：
将酵母培养物置于光板装置上接受蓝光照射，或在避光培养箱内的滚筒式培养管中培养。
5：数据分析方法：
流式细胞术数据通过FlowJo软件或自主编写的MATLAB代码进行分析。
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Light Plate Apparatus
LPA
Used for exposing cultures of yeast to blue light.
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BD LSRII multi-laser analyzer
LSRII
BD
Used for flow cytometry analysis.
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Attune NxT Flow Cytometer
NxT
Attune
Used for flow cytometry analysis.
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Nikon Eclipse-TI inverted microscope
Eclipse-TI
Nikon
Used for imaging and stimulating cells.
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