研究目的
自动化提取不同刺激条件下内皮细胞荧光图像序列中的细胞内钙离子浓度变化曲线。
研究成果
该提出的自动化系统能有效从荧光图像序列中提取细胞内钙离子浓度分布图,精准追踪不同刺激条件下的内皮细胞,实现数据的高效精确提取。该系统自动重定位感兴趣区域并处理大规模图像集的能力,较手动方法具有显著优势。
研究不足
该研究承认,要找到一个精确的数学模型来描述细胞运动具有复杂性,且由于运动伪影可能导致细胞在某些帧中暂时消失,这可能会影响追踪准确性。
1:实验设计与方法选择:
本研究结合数字图像处理技术与卡尔曼估计支持的多目标跟踪方法,实现从荧光图像序列中自动提取细胞内钙离子动态变化曲线。
2:样本选择与数据来源:
使用两种不同刺激(ATP化学刺激与玻璃微电极施加的机械刺激)获取的图像序列。
3:实验设备与材料清单:
设备包括正置落射荧光显微镜(Axiolab)、蔡司40倍平场消色差物镜、滤光轮及相机;材料包含用于钙离子测量的Fura-2/AM荧光染料。
4:实验流程与操作步骤:
包括加载荧光图像、生成比值图像序列、应用降噪与自适应阈值处理,以及通过卡尔曼滤波器进行细胞追踪。
5:数据分析方法:
通过采集比值图像序列各帧中感兴趣区域(ROI)的平均强度值,构建钙离子动态变化曲线。
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Filter wheel
Lambda 10
Sutter Instrument
Positions alternately along the optical path the two filters that allow the passage of light at 340 and 380 nm.
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Fura-2/AM
Molecular Probes
Calcium-sensitive fluorophore for measuring intracellular Ca2+ signals.
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Axiolab microscope
Carl Zeiss
Upright epifluorescence microscope for visualizing endothelial cells.
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Zeiss 40× Achroplan objective
Carl Zeiss
Water-immersion objective for microscopy.
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Camera
Extended-ISIS Camera
Photonic Science
Used to capture fluorescence images.
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