研究目的
研究激光束如何影响共聚焦和STED成像模式下的荧光寿命，以提高STED成像分辨率。
研究成果
该研究表明，在STED成像模式下通过延长照明时间来增加荧光寿命，可在相同耗尽功率下提高分辨率。这一现象在荧光微球和生物样本中均有观察到，提示有望合成对环境变化敏感的荧光标记物以增强STED纳米显微镜的分辨率。
研究不足
荧光寿命的增加提高了分辨率，但也会导致光漂白，降低信号强度。分辨率与信号强度之间的平衡是一个限制因素。
1：实验设计与方法选择：
开发了一套STED-FLIM成像系统，用于同步采集荧光标记的强度信号和寿命信号。该系统包含激发光束与损耗光束，可在共聚焦与STED成像模式下观测荧光寿命变化。
2：样本选择与数据来源：
使用两种荧光微球（直径40纳米和100纳米）以及固定HeLa细胞中Star635P标记的人源Nup153蛋白。
3：实验设备与材料清单：
系统包含皮秒二极管激光器、超快钛宝石激光器、光电倍增管，以及透镜、反射镜和光纤等光学元件。
4：实验流程与操作步骤：
在共聚焦与STED模式下对样本成像，通过递增照明时间测量荧光寿命。
5：数据分析方法：
采用SPCM软件分析荧光寿命，通过半高全宽（FWHM）测量评估分辨率提升效果。
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获取完整内容-
picosecond diode laser head
LDH-D-C-635
PicoQuant
Provides the excitation beam at a wavelength of 635 nm.
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photmultiplier tube
H7422-40
Hamamatsu Photonics
Collects the fluorescence signal.
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oil-immersion objective
HCX PL APO, 100×/1.40-0.70 OIL
Leica
Used for focusing the laser beams onto the sample.
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ultrafast Ti:sapphire laser
Provides the depletion beam at a wavelength of 760 nm.
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