研究目的
为推动基质辅助激光解吸电离质谱成像(MALDI-MSI)从基础研究向临床应用过渡,需对福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织进行分析。本研究旨在优化FFPE样本的MALDI-MSI原位胰蛋白酶消化方法,并验证不同实验地点能否获得可重复的相似结果。
研究成果
通过遵循标准化的MALDI-MSI工作流程,可以保持空间分辨率和位点间重现性。
研究不足
FFPE样本制备用于MALDI-MSI被认为耗时长且流程复杂,需长达两天的准备工作。与传统显微镜技术相比,其空间分辨率较低且MALDI-MSI分析所需时间更长。
1:实验设计与方法选择:
将FFPE组织制备用于MALDI-MSI分析。采用自动化喷雾器对样本进行胰蛋白酶包被,随后通过潮解作用维持稳定湿润环境进行孵育。消化完成后,使用相同喷雾装置喷涂CHCA基质,并以50微米空间分辨率通过rapifleX MALDI Tissuetyper质谱仪进行分析。数据通过flexImaging、SCiLS和R软件进行处理。
2:样本选择与数据来源:
FFPE组织(小鼠肠道、人卵巢畸胎瘤、采自三个不同部位的肿瘤实体组织微阵列)。
3:实验设备与材料清单:
rapifleX MALDI Tissuetyper质谱仪、TM喷雾器、胰蛋白酶、CHCA基质。
4:实验流程与操作步骤:
使用自动化喷雾器进行胰蛋白酶包被,经潮解孵育后喷涂CHCA基质,最后通过rapifleX MALDI Tissuetyper进行分析。
5:数据分析方法:
采用flexImaging、SCiLS和R软件进行数据分析。
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