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利用AgHalo传感器通过荧光分析法量化活细胞中的蛋白质稳态

DOI：10.1002/cpch.58 期刊：Current Protocols in Chemical Biology 出版年份：2018 更新时间：2025-09-23 15:21:21
摘要： 适当的细胞蛋白质稳态对细胞健康和存活至关重要。外源应激条件会破坏蛋白质稳态并导致细胞蛋白聚集。我们开发了一种荧光传感器（AgHalo）来量化应激诱导的蛋白质稳态缺陷。该AgHalo传感器采用不稳定的HaloTag变体来模拟易聚集的细胞蛋白，并配备了一系列荧光探针——当传感器形成可溶性寡聚体或不溶性聚集体时，这些探针会呈现荧光增强现象。本文提供了使用方案，阐述如何通过直接荧光读数及荧光酶标仪/显微镜观察，利用AgHalo传感器在活细胞中可视化和量化蛋白质组应激。此外还描述了将AgHalo传感器与荧光探针及市售HaloTag探针联用实现双色成像实验的方案。这些方案能借助AgHalo传感器实现活细胞蛋白质稳态的可视化和量化——这是以往持续荧光方法难以完成的任务。
作者： Matthew Fares，Xin Zhang
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研究概述 实验方案 设备清单

研究目的

开发一种荧光传感器（AgHalo），用于量化活细胞中应激诱导的蛋白质稳态缺陷，从而通过直接荧光读数实现蛋白质组应激的可视化和量化。

研究成果

AgHalo传感器为在活细胞中可视化和量化蛋白质稳态提供了有力工具，能够以时间和空间分辨率揭示应激诱导的蛋白质稳态缺陷。

研究不足

局限性包括荧光探针在强光照射下可能发生光漂白，以及需要高转染效率以实现最佳信噪比。

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