研究目的
研究干涉散射(iSCAT)显微镜实时检测单个活细胞分泌的单个未标记蛋白的能力。
研究成果
iSCAT显微镜为研究单蛋白水平的细胞分泌提供了一种强大的工具，具有亚秒级时间分辨率。它不受光漂白或闪烁效应的影响，可实现单蛋白灵敏度。未来的应用可能侧重于阐明复杂的细胞相互作用。
研究不足
该技术本身具有非特异性，可检测任何蛋白质或纳米颗粒。通过与标准蛋白样品校准，或结合荧光显微镜等其他技术，可提高其特异性。
1：实验设计与方法选择：
iSCAT显微镜装置包含改装的倒置显微镜、高数值孔径（NA）物镜及成像透镜，用于将粒子的背向散射光聚焦至相机芯片。该方法通过干涉混频技术，将蛋白质微弱散射光与次级参考波进行叠加。
2：样本选择与数据来源：
采用永生化B细胞系Laz388，用于展示活细胞分泌单蛋白的检测过程。
3：实验设备与材料清单：
包括波长445 nm的二极管激光器、高数值孔径（100X/1.46 NA）物镜、CMOS相机，以及分束器、透镜等光学元件。
4：46 NA）物镜、CMOS相机，以及分束器、透镜等光学元件。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：包含搭建iSCAT显微镜系统、样本制备，以及实时检测活细胞分泌单蛋白的全过程。
5：数据分析方法：
通过二维傅里叶滤波降低相机噪声，将图像转换为iSCAT对比度，并运用峰值搜索算法检测和标记单粒子。
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获取完整内容-
diode laser
445 nm
Illumination source for iSCAT microscopy
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high numerical aperture (NA) objective
100X/1.46 NA
Focusing the laser beam onto the sample and collecting the scattered light
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CMOS camera
Detecting the scattered light and reference beam
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beam splitter
AR-coated, wedged
Splitting the incident beam and reflecting the reference and scattered beams
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