研究目的
使用基因编码钙指示剂GCaMP6s监测幼年斑马鱼神经丘中单个毛细胞内以及细胞间依赖于MET通道和突触前的钙变化。
研究成果
该协议提供了一种有效的方法，用于收集活体动物内毛细胞在其自然完整状态下活动的宝贵信息。该方法与哺乳动物研究相辅相成，可作为测试基因编码指示剂在检测哺乳动物毛细胞活动中有效性的平台。
研究不足
该制备物仅在建立后1-3小时内保持稳定。重复成像试验后可能出现光漂白和光毒性。该技术对运动伪影敏感，需要相当程度的练习和技巧才能正确实施。
1：溶液制备：
包括α-银环蛇毒素、胚胎缓冲液（E3）、神经元缓冲液（NB）及麻醉用MS-222储备液的配制。
2：3）、神经元缓冲液（NB）及麻醉用MS-222储备液的配制。 成像腔室与固定针制备：
2. 成像腔室与固定针制备：详述成像腔室的搭建及用于幼虫固定的固定针制作。
3：麻痹与刺激用针头制备：
描述心脏注射针头与流体喷射针头的制备流程。
4：幼虫固定于成像腔室：
概述将幼虫固定于成像腔室的操作步骤。
5：心脏腔室注射α-银环蛇毒素麻痹幼虫：
详述通过麻痹幼虫实现成像期间运动抑制的方法。
6：显微镜与流体喷射系统准备：
描述共聚焦显微镜与刺激用流体喷射系统的组装流程。
7：幼虫与流体喷射器对准：
解释确保精准刺激与成像的对准操作过程。
8：图像采集方案一：
单平面采集：详述单平面成像的参数设置与操作流程。
9：图像采集方案二：
多平面采集：描述多平面成像的参数设置与操作流程。
10：对照实验：
药物阻断所有诱发钙信号：概述使用BAPTA阻断钙信号作为对照的方法。
11：对照实验：
药物阻断突触前钙信号（可?。好枋鲅≡裥允褂靡觳ㄗ瓒贤淮デ案菩藕诺姆桨浮?/p>
12：图像处理与数据图形化表示：
解释使用Fiji软件进行图像处理与数据可视化的方式。
13：图像处理与时空钙信号热图表示：
详述钙信号可视化热图的生成方法。
14：图像处理与基于Fiji宏的时空热图生成：
描述利用Fiji宏实现热图自动化生成的操作。
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GCaMP6s
Genetically encoded calcium indicator used to measure calcium signals in zebrafish lateral-line hair cells.
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confocal microscope
Used for imaging calcium signals in vivo.
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fluid-jet
Used to stimulate lateral-line hair cells in a controlled and reproducible manner.
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α-bungarotoxin
Used to paralyze zebrafish larvae during functional imaging.
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MS-222
Anesthetic used to immobilize larvae during pinning and α-bungarotoxin injection.
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BAPTA
Used to cleave the tip links required to gate apical MET channels located in hair bundles as a control.
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isradipine
Used to block the L-type calcium channels at the hair-cell presynapse as an optional control.
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Fiji
Open source analysis software used for image processing and data representation.
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