研究目的
开发一种高灵敏度、高选择性的荧光探针,用于检测线粒体中的苯硫酚及其在活细胞中引发的氧化应激过程。
研究成果
成功开发了线粒体靶向荧光探针ROAL,用于选择性可视化活细胞线粒体中的苯硫酚及其诱导的氧化应激过程。ROAL对苯硫酚表现出高选择性和灵敏度,并具有超低检测限。该探针有效用于活细胞线粒体苯硫酚的成像,证实了内源性活性氧清除苯硫酚的能力,揭示了苯硫酚与细胞氧化应激之间的关联。
研究不足
该研究聚焦于特定细胞系(HepG2和HeLa细胞)中苯硫酚的检测,在未经进一步验证的情况下,可能无法直接适用于其他细胞类型或体内模型。
1:实验设计与方法选择:
基于新型红色发射罗丹明衍生物(ROAP),通过连接吡啶鎓阳离子作为线粒体靶向基团并引入2,4-二硝基苯基部分作为硫酚传感基团,设计出探针ROAL。
2:样本选择与数据来源:
采用HepG2和HeLa细胞进行细胞成像研究。
3:实验设备与材料清单:
梅特勒-托利多pH计、日立F-2700荧光分光光度计、UV-1800PC紫外可见分光光度计、瓦里安Unity INOVA-400和布鲁克AVANCE III-400核磁共振仪、AXIMA-CFR plus基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪、布鲁克Vertex 70傅里叶变换红外光谱仪、奥林巴斯FV1000和尼康A1激光扫描共聚焦显微镜。
4:实验流程与操作步骤:
检测了探针的光谱特性、选择性和细胞毒性,并通过细胞成像研究评估其对活细胞中硫酚的检测能力。
5:数据分析方法:
通过荧光强度测量和共定位实验分析探针性能。
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Hitachi F-2700 fluorescence spectrophotometer
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