研究目的
为确定远程光生物调节(PBM)诱导神经?;さ挠行гご矸桨?,并阐明远程PBM增强脑组织抗损伤能力的分子机制。
研究成果
通过为期10天的远程光生物调节预处理,可通过调控脑部转录组(包括上调细胞信号传导、迁移、氧化应激反应通路及血脑屏障调节)为小鼠提供针对MPTP诱导损伤的神经保护作用。这表明远程光生物调节可作为经颅光生物调节的可行替代方案用于神经保护,在帕金森病及其他神经退行性疾病中具有潜在应用价值。
研究不足
由于MPTP诱导的损伤程度较轻,该研究可能因统计功效不足而未能检测出某些结局指标的效应。转录组中大多数表达变化幅度较小,且部分微阵列发现未通过qRT-PCR验证,提示可能存在假阳性结果。本研究仅限于小鼠模型,可能无法直接推广至人类。
1:实验设计与方法选择:
本研究采用小鼠MPTP神经毒素帕金森病模型。小鼠随机分组接受不同疗程的远程光生物调节预处理(2、5或10天)或假处理,随后注射MPTP或生理盐水。实验设计包含体视学细胞计数、RNA微阵列分析和通路富集分析以评估神经?;ぷ饔眉胺肿踊?。
2:5或10天)或假处理,随后注射MPTP或生理盐水。实验设计包含体视学细胞计数、RNA微阵列分析和通路富集分析以评估神经保护作用及分子机制。 样本选择与数据来源:
2. 样本选择与数据来源:使用雄性BALB/c小鼠(n=62),因其毛发透光性适合实验。样本包括用于免疫组化和RNA提取的脑组织。
3:实验设备与材料清单:
设备包括手持式LED面板(WARP 10;Quantum Devices)、冷冻切片机(Leica SM2010R)、体视学软件(StereoInvestigator)、显微镜(Leitz Orthoplan)、相机(QICAM Fast 1394)、分光光度计(NanoDrop ND-1000)、生物分析仪(Agilent 2100)、微阵列系统(Illumina MouseWG-6 v2.0表达珠芯片)和qPCR仪(Roche Lightcycler 480)。材料包括抗体(如抗-TH、抗-FOS)、试剂盒(如mirVana PARIS Kit、Illumina TotalPrep RNA扩增试剂盒)及化学试剂(如MPTP、福尔马林)。
4:4)、分光光度计(NanoDrop ND-1000)、生物分析仪(Agilent 2100)、微阵列系统(Illumina MouseWG-6 v0表达珠芯片)和qPCR仪(Roche Lightcycler 480)。材料包括抗体(如抗-TH、抗-FOS)、试剂盒(如mirVana PARIS Kit、Illumina TotalPrep RNA扩增试剂盒)及化学试剂(如MPTP、福尔马林)。 实验流程与操作规范:
4. 实验流程与操作规范:小鼠背部和后肢接受670nm光照射(50 mW/cm2,每日90秒),头部遮蔽。预处理后注射MPTP(25 mg/kg/天,连续2天)或生理盐水。注射后7天采集组织进行免疫组化(TH和FOS标记)及RNA提取。RNA通过微阵列分析并由qRT-PCR验证。数据分析包括标准化、差异表达及使用DAVID、GSEA和IPA进行通路富集分析。
5:数据分析方法:
细胞计数采用单因素方差分析(Sidak检验),qRT-PCR采用Student t检验。微阵列数据通过三次样条法、平均值法和分位数法标准化,通路富集分析使用DAVID、GSEA和IPA完成。
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获取完整内容-
Microscope
Orthoplan
Leica
Used for stereological cell counting.
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Bioanalyzer
2100
Agilent Technologies
Used for assessing RNA integrity.
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Software
StereoInvestigator
MBF Bioscience
Used for stereological cell counting.
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LED panel
WARP 10
Quantum Devices
Used for delivering photobiomodulation light irradiation to mice.
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Freezing microtome
SM2010R
Leica Biosystems
Used for sectioning brain tissues.
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Camera
QICAM Fast 1394
QImaging
Used for imaging during stereology.
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Spectrophotometer
ND-1000
NanoDrop
Used for measuring RNA concentration and purity.
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Microarray system
MouseWG-6 v2.0 Expression BeadChips
Illumina
Used for RNA microarray analysis.
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qPCR machine
Lightcycler 480
Roche Diagnostics
Used for quantitative reverse transcription PCR.
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Software
GenomeStudio Gene Expression Module
Illumina
Used for microarray data analysis.
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