研究目的
探索荧光纳米金刚石（FNDs）作为靶向肿瘤中VEGF受体的荧光团，以解决当前荧光团在长期成像应用中光稳定性和生物相容性的局限性。
研究成果
用scVEGF功能化的FNDs对VEGF受体保持高亲和力，并且与未靶向的FNDs相比显示出在肿瘤中的优先积累，验证了它们在诊断成像方面的潜力。鼓励进一步优化荧光亮度。
研究不足
该研究使用了特定尺寸的FNDs（140纳米），这可能并非适用于所有应用场景；由于颗粒尺寸问题，全身成像未能成功实现。在高mTz密度下，胶体稳定性受到影响。为提高成像灵敏度，可进一步优化FNDs的亮度。
1：实验设计与方法选择：
采用点击化学技术将scVEGF-TCO共轭偶联于荧光纳米金刚石（FND）以实现VEGF受体靶向。
2：样本选择与数据来源：
使用140纳米FND、scVEGF-TCO、细胞系（293/KDR、ECFCs、CCD1137成纤维细胞）及携带4T1乳腺癌肿瘤的Balb/c小鼠。
3：实验设备与材料清单：
FNDs（Adámas Nanotechnologies公司NDNV140nmHi型号）、CDI、mTz-PEG-NH2、Cy5-TCO、scVEGF-TCO、ELISA试剂盒、显微镜（蔡司Axio Observer、INCell 2200）、光谱仪（Ocean Optics HR2000）、IVIS成像系统。
4：Cy5-TCO、scVEGF-TCO、ELISA试剂盒、显微镜（蔡司Axio Observer、INCell 2200）、光谱仪（Ocean Optics HR2000）、IVIS成像系统。 实验步骤与操作流程：
4. 实验步骤与操作流程：通过mTz功能化修饰FND，与scVEGF-TCO共轭，开展体外实验（细胞活性检测、ELISA、细胞保护作用、磷酸化检测），进行小鼠体内注射，肿瘤组织采集，冰冻切片，显微成像与微光谱分析。
5：数据分析方法：
采用SDS-PAGE、ELISA、Western blot、荧光显微镜、微光谱分析及统计分析（ANOVA），辅助软件包括Fiji和Prism。
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UV-Vis spectrophotometer
Lambda 35
PerkinElmer
Used for absorption spectra analysis of FND-Cy5 conjugates.
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microscope
Axio Observer 1.0
Zeiss
Used for imaging cryosections and microspectroscopy.
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spectrometer
HR2000
Ocean Optics
Used for microspectroscopy to confirm FND signals.
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laser
Sapphire
Coherent Inc.
Used for excitation in microspectroscopy.
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-
two-photon microscope
LSM 7MP
Zeiss
Used for additional imaging of tumor sections.
ZEISS LSM 990 Spectral Multiplex
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fluorescent nanodiamond
NDNV140nmHi
Adámas Nanotechnologies
Used as fluorophores for targeting VEGF receptors in tumor imaging.
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high content imager
INCell 2200
GE Healthcare
Used for cell imaging and analysis.
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IVIS imaging system
IVIS kinetic
Caliper LifeSciences, Perkin Elmer
Used for whole-body imaging of mice.
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