研究目的
开发一种灵敏且选择性高、具有大斯托克斯位移的近红外(NIR)发射荧光探针,用于活细胞中次氯酸根的检测与成像,鉴于其在生物系统中的重要性及与多种疾病的关联。
研究成果
DCPO-DMTC探针是一种新型、灵敏且选择性检测次氯酸根的工具,具有近红外发射和大斯托克斯位移特性,可在活细胞中实现有效生物成像。该探针响应迅速、细胞毒性低,具有进一步生物应用潜力,但需优化以适应更广pH范围及体内使用。
研究不足
该探针的效能具有pH依赖性,在碱性条件下表现更佳,这可能限制其在某些生理环境中的应用。本研究在体外及细胞培养中进行,未探索体内应用,也未充分解决复杂生物系统中的潜在干扰问题。
1:实验设计与方法选择:
本研究通过次氯酸盐对二甲基硫代氨基甲酸酯(DMTC)基团进行氧化脱?;?,合成了荧光探针(DCPO-DMTC),从而产生近红外荧光"开启"响应。采用紫外-可见光谱和荧光光谱监测响应,使用共聚焦显微镜进行细胞成像。
2:样本选择与数据来源:
次氯酸盐及其他活性氧(ROS)来自商业渠道或化学反应制备。生物成像研究使用RAW 264.7小鼠巨噬细胞。
3:7小鼠巨噬细胞。 实验仪器与材料清单:
3. 实验仪器与材料清单:仪器包括布鲁克AV-400核磁共振波谱仪、赛默飞Q Exactive质谱仪、紫外-可见分光光度计、日立F-7000荧光分光光度计、赛默飞EVOS荧光显微镜及蔡司LSM710META共聚焦显微镜。材料购自J&K中国化学有限公司和通用试剂公司,包括溶剂、色谱用硅胶及ROS生成用化学品。
4:实验流程与操作步骤:
合成并表征探针,在含不同次氯酸盐浓度的缓冲溶液中记录紫外-可见及荧光光谱。测试对其他ROS的选择性。通过MTT法评估细胞毒性。细胞培养与成像实验中,采用LPS和PMA刺激诱导次氯酸盐产生。
5:数据分析方法:
测量并分析荧光强度的线性关系与检测限(LOD)。统计分析包含LOD的标准偏差计算。使用ImageJ软件对荧光图像进行半定量分析。
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