研究目的
在一氧化碳预处理对视神经夹伤大鼠模型视网膜神经?；ぷ饔们绷Φ难芯俊?/p>
研究成果
低浓度一氧化碳预处理通过增加视网膜神经节细胞存活率、改善视觉功能以及抑制caspase-9和caspase-3活性来阻断凋亡，从而为视神经挤压伤提供神经?；ぷ饔谩Ｕ獗砻髌湓谑由窬”涞纳窬；ぶ瘟浦芯哂星痹谟τ眉壑?，但需进一步研究以确认临床应用的安全性和有效性。
研究不足
该研究仅限于大鼠模型，可能无法完全适用于人类。一氧化碳的剂量和暴露参数（250 ppm持续1小时）可能需要针对不同情况进行优化。关于一氧化碳在治疗应用中的毒性安全问题尚未充分解决，且长期影响的研究未超过2周。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用视神经夹闭（ONC）大鼠模型探究一氧化碳（CO）预处理的神经?；ぷ饔谩Ｊ笛榇笫蠓治椋篊O+夹闭组、单纯夹闭组和假手术组。在ONC前对大鼠进行250 ppm CO吸入处理1小时。通过苏木精-伊红染色、荧光金标记、闪光视觉诱发电位分析、TUNEL染色及半胱天冬酶活性检测等方法评估视网膜神经节细胞存活率、视觉功能及凋亡情况。
2：样本选择与数据来源：
实验使用108只6周龄（体重150-200克）的成年雄性Sprague-Dawley大鼠（来自上海交通大学实验动物中心），随机分为每组36只的三个实验组。
3：实验设备与材料清单：
主要设备包括双目手术显微镜、Sugita钛合金动脉瘤夹钳II代、尼康Eclipse E100显微镜、奥林巴斯BX-51荧光显微镜、FVEP分析仪（BMLab 4.0）以及各类染色与检测试剂盒（如原位细胞凋亡检测试剂盒、Caspase-9和Caspase-3活性检测试剂盒）。实验材料包含250 ppm CO气体（上海宝钢气体有限公司）、荧光金、苏木精、伊红、戊二醛、多聚甲醛及水合氯醛、氯胺酮/赛拉嗪等麻醉剂。
4：0）以及各类染色与检测试剂盒（如原位细胞凋亡检测试剂盒、Caspase-9和Caspase-3活性检测试剂盒）。实验材料包含250 ppm CO气体（上海宝钢气体有限公司）、荧光金、苏木精、伊红、戊二醛、多聚甲醛及水合氯醛、氯胺酮/赛拉嗪等麻醉剂。 实验流程与操作规范：
4. 实验流程与操作规范：大鼠先接受CO或空气预处理1小时，随后麻醉。使用动脉瘤夹对右眼视神经实施9秒夹闭，假手术组仅暴露视神经不夹闭。术后1周和2周处死大鼠，取视网膜组织进行苏木精-伊红染色、荧光金标记、FVEP检测、TUNEL染色及半胱天冬酶活性测定。具体步骤包括组织固定、切片、染色、成像及定量分析。
5：数据分析方法：
采用单因素方差分析（ANOVA）结合Tukey事后检验，定量数据以均值±标准差表示。使用Image Pro Plus软件进行细胞计数，数据分析人员对分组设盲。
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Olympus BX-51 Fluorescence Microscope
BX-51
Olympus Corporation
Used for observing and counting FluoroGold-labeled retinal ganglion cells at x20 magnification.
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Sugita Titanium Aneurysm Clip II Applier
II Applier
Mizuho Medical Co., Ltd
Used to perform the optic nerve crush surgery by applying pressure to the optic nerve for 9 seconds.
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Nikon Eclipse E100 Microscope
E100
Nikon Corporation
Used for imaging H&E-stained retinas at high power fields (x400 magnification).
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FVEP Analyzing Instrument
BMLab 4.0
Second Military Medical University
Used to measure flash visual evoked potentials to assess visual function, including latency and amplitude of waves.
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In Situ Cell Death Detection Kit
Roche Diagnostics
Used for TUNEL staining to detect apoptotic cells in retinal sections.
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Caspase-9 Activity Assay Kit
Beyotime Institute of Biotechnology
Used to measure caspase-9 enzymatic activity in retinal samples.
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Caspase-3 Activity Assay Kit
Beyotime Institute of Biotechnology
Used to measure caspase-3 enzymatic activity in retinal samples.
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Image Pro Plus Software
version 6.0
Media Cybernetics, Inc.
Used for quantitative analysis of cell numbers in retinal ganglion cell layer from H&E-stained images.
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FluoroGold
Sigma-Aldrich; Merck KGaA
Used for retrograde labeling of retinal ganglion cells to quantify survival rates.
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Carbon Monoxide Gas
250 ppm
Shanghai Baosteel Gases Co., Ltd.
Used for preconditioning rats by inhalation to provide neuroprotection against optic nerve crush.
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