研究目的
评估不同浓度的亮蓝绿(BBG)及其不同生化特性在氙光源以不同距离照射下对视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响,以确定术中使用的安全参数。
研究成果
浓度为0.25 mg/mL的BBG在玻璃体视网膜手术中使用时,在聚焦照明下安全使用时限为5分钟,在散射照明下为15分钟。该药物可与等渗葡萄糖溶液安全混合且无明显毒性,未观察到通过caspase-3途径引发的细胞凋亡。
研究不足
该研究是在体外进行的,因此结果可能无法完全适用于体内环境。其仅针对特定细胞类型和条件,对于其他染料及临床应用还需进一步研究。
1:实验设计与方法选择:
研究通过在不同浓度、距离、强度和时间间隔下,将人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)暴露于氙灯光照下的BBG中,以评估细胞毒性、渗透压效应、光吸收特性及caspase-3活性。
2:样本选择与数据来源:
实验所用ARPE-19细胞购自美国典型培养物保藏中心,在标准条件下培养。
3:实验设备与材料清单:
氙内照明器(Welch Allyn)、光度计(Extech Instruments)、微孔板读数仪(BioTek Synergy HT)、WST-1检测试剂盒(Hoffman-La Roche)、BBG(Sigma-Aldrich)及HBSS、葡萄糖溶液等溶剂。
4:实验流程与操作步骤:
细胞经BBG处理并光照后洗涤,采用WST-1法检测存活率;通过微孔板读数仪测量光吸收值,利用In-Cell ELISA评估caspase-3活性。
5:数据分析方法:
使用GraphPad Instat3软件进行统计学分析(Student's t检验和ANOVA),以P<0.05为显著性标准。
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获取完整内容-
Xenon Endoilluminator
Not specified
Welch Allyn
Used as a light source for illuminating cells during experiments.
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Light Meter
Not specified
Extech Instruments
Used to measure light intensity in foot candles.
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Microplate Reader
Synergy HT
BioTek
Used to measure absorbance in assays such as WST-1 and caspase-3 activity.
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WST-1 Assay Kit
Not specified
Hoffman-La Roche
Used to assess cell viability by measuring mitochondrial activity.
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Brilliant Blue Green
Not specified
Sigma-Aldrich
Vital dye used for staining and toxicity testing.
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In-Cell ELISA Assay Kit
Not specified
Thermo Fisher Scientific
Used to evaluate caspase-3 activity in cells.
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