研究目的
开发一种快速且选择性检测活细胞中一氧化氮的荧光探针,以解决反应时间长及其他分析物干扰的问题。
研究成果
dRB-OPD探针具有快速响应(40秒内)、高选择性(避免Cys、DHA、AA、MGO的干扰)和低细胞毒性的特点,能够有效检测活细胞中的外源性和内源性一氧化氮,是研究一氧化氮相关生理过程的有力工具。
研究不足
该探针的性能在受控实验室条件下进行了评估;潜在局限性包括在更复杂的生物环境中的适用性以及长期稳定性。优化措施可能包括在体内测试或使用其他细胞类型进行测试。
1:实验设计与方法选择:
本研究合成了以邻苯二胺为识别基团的罗丹明脱氧内酰胺类荧光探针(dRB-OPD)用于一氧化氮检测,通过荧光光谱和紫外-可见光谱表征探针响应特性。
2:样本选择与数据来源:
在磷酸盐缓冲溶液(PBS)中测试了不同浓度一氧化氮及其他潜在干扰物的探针反应,细胞成像实验使用HepG2和RAW 264.7细胞系。
3:7细胞系。 实验设备与材料清单:
3. 实验设备与材料清单:设备包括布鲁克Avance II 400核磁共振仪、布鲁克Autoflex基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪、珀金埃尔默2400元素分析仪、日立F-4600荧光分光光度计、安捷伦CARY 60紫外-可见分光光度计、梅特勒-托利多Delta 320 pH计及尼康A1 plus共聚焦显微镜;试剂来自Sigma-Aldrich和阿拉丁。
4:实验流程与操作步骤:
通过化学反应合成探针并进行纯化与表征,荧光检测激发波长550 nm、发射波长560-640 nm,细胞培养及成像在特定条件下进行。
5:数据分析方法:
采用荧光强度测量、核磁共振与质谱结构确证,以及统计学方法测定检测限与选择性。
独家科研数据包,助您复现前沿成果,加速创新突破
获取完整内容-
Bruker Avance II 400 spectrometer
Avance II 400
Bruker
Used for obtaining 1H NMR and 13C NMR spectra with tetramethylsilane as internal standard.
-
Bruker Autoflex MALDI-TOF mass spectrometer
Autoflex
Bruker
Used for mass spectra analysis.
-
Perkin-Elmer 2400 elemental analyzer
2400
Perkin-Elmer
Used for elemental analysis.
-
Hitachi F-4600 spectrophotometer
F-4600
Hitachi
Used for fluorescence spectra measurements.
-
Agilent CARY 60 UV-Vis spectrophotometer
CARY 60
Agilent
Used for UV-vis absorption spectra.
-
Mettler-Toledo Delta 320 pH meter
Delta 320
Mettler-Toledo
Used for pH measurements.
-
Nikon A1 plus confocal microscope
A1 plus
Nikon
Used for fluorescence imaging experiments in cells.
-
登录查看剩余5件设备及参数对照表
查看全部