研究目的
开发一种灵敏且选择性开启的荧光探针，用于水环境和活细胞中半胱氨酸的检测，以满足生物体系中有效分析的需求。
研究成果
所开发的探针展现出高灵敏度（检测限23 nM）、对半胱氨酸相对于其他分析物的高选择性、优异的水溶性和生物相容性，成功应用于活细胞内半胱氨酸成像，证实了其在生物应用中的潜力。
研究不足
该探针对半胱氨酸和同型半胱氨酸均有响应，缺乏绝对特异性；在碱性条件下可能发生水解；合成过程中使用了有机溶剂，但检测是在水性缓冲液中进行。
1：实验设计与方法选择：
以香豆素衍生物为荧光团、DNBS为识别基团设计探针。通过回流和偶联反应合成，结构经核磁共振（NMR）和高分辨质谱（HRMS）确认。在磷酸盐缓冲液中测定荧光和紫外吸收光谱。
2：样本选择与数据来源：
探针1及分析物（氨基酸、抗坏血酸、谷胱甘肽）储备液均用去离子水或磷酸盐缓冲液配制。采用HeLa细胞进行细胞成像实验。
3：实验仪器与材料清单：
仪器包括核磁共振仪、高分辨质谱仪、高效液相色谱仪、荧光分光光度计、紫外-可见分光光度计。材料包含2,4-二硝基苯磺酰氯、三乙胺、甲苯、二氯甲烷、乙酸乙酯等化学品及色谱用硅胶。
4：实验步骤与操作流程：
通过特定化学反应合成探针1；将探针与分析物混合并孵育后记录光谱；采用HPLC分析验证作用机制；进行细胞培养及探针孵育成像实验。
5：数据分析方法：
测量荧光强度，通过线性回归计算检测限，对选择性及竞争实验进行统计分析。
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获取完整内容-
NMR spectrometer
Used for confirming the structure of synthesized compounds through nuclear magnetic resonance spectroscopy.
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HRMS
Used for high-resolution mass spectrometry to confirm molecular weights of synthesized compounds.
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HPLC
Used to verify the sensing mechanism by analyzing chromatographic peaks of probe and reaction products.
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Fluorescence spectrophotometer
Used to measure fluorescence spectra and intensities for detection and analysis of cysteine.
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UV-Vis spectrophotometer
Used to measure absorption spectra of the probe and analytes.
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Confocal microscope
Used for cellular imaging to monitor intracellular cysteine in living cells.
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