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单分子荧光光谱和硫黄素T荧光检测法揭示α-突触核蛋白突变体对脂质结合与聚集的不同影响
摘要： 目前已知有六个α-突触核蛋白点突变与家族性帕金森综合征相关：A30P、E46K、H50Q、G51D、A53E和A53T。我们通过全面的体外分析研究了所有α-突触核蛋白突变对脂质结合及聚集行为的影响。结果显示：A30P的脂质结合能力显著降低，G51D中度减弱，其他突变体仅有极轻微下降。A30P特别容易形成金属离子诱导的寡聚体，而A53T仅表现出微弱的寡聚倾向。相反，H50Q、G51D和A53T快速形成纤维，A30P则形成缓慢，表明易形成寡聚体的突变体形成纤维的倾向较低。铁离子存在时野生型α-突触核蛋白、A30P和A53T的纤维形成均受抑制的现象支持该结论。此外，我们发现A30P或A53T与野生型α-突触核蛋白混合物的聚集动力学由聚集更快的变体决定。这些结果表明分子层面存在差异机制参与α-突触核蛋白病理过程，这可能有助于深入理解帕金森病发病机制，并为制定预防策略和疾病修饰治疗提供潜在关联。
关键词： 突触核蛋白病，α-突触核蛋白（α-Synuclein），帕金森病，蛋白质-脂质相互作用，蛋白质聚集，突变体
更新于2025-09-23 15:23:52
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基于理性结构的淀粉样折叠荧光探针设计
摘要： 淀粉样纤维是多种人类疾?。òㄅ两鹕?、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化症和朊病毒?。┑牟±肀曛疚?。治疗淀粉样疾病受到诸多因素阻碍，其中就包括及时检测的困难，因此早期识别淀粉样纤维将有助于这些疾病的治疗。在此，我们报道了一种小分子荧光探针，它能选择性识别β-淀粉样蛋白（1-42）、α-突触核蛋白和HET-s（218-289）蛋白的纤维形态，而非其单体构象。该报告分子的合理设计基于淀粉样蛋白的关键结构特征——众所周知的β-折叠重复基序。
关键词： HET - s蛋白、荧光探针、淀粉样纤维、α - 突触核蛋白、β - 淀粉样蛋白（1 - 42）
更新于2025-09-04 15:30:14
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结合位点的多态特异性分布决定了α-突触核蛋白纤维中硫黄素T的荧光强度
摘要： 硫黄素T（ThT）是体外半定量追踪淀粉样蛋白形成最常用的荧光染料，能特异性探测纤维状β-折叠含量。近年来研究表明，淀粉样纤维的结构多态性是体内外淀粉样蛋白形成的重要特征。因此，结合淀粉样蛋白结构多态性理解ThT与淀粉样蛋白的相互作用，对正确解读ThT荧光数据至关重要。本研究以两种形态相异但化学组成相同的α-突触核蛋白聚集体为对象，探究了纤维形态对ThT荧光及结合位点的影响。虽然两种聚集体的β-折叠含量相近，但在ThT荧光检测中表现出类型特异性的荧光强度差异。进一步通过纤维结合ThT的荧光寿命测量发现，这些聚集体上至少存在两种性质不同的ThT结合位点。结合位点在纤维表面的相对分布具有形态依赖性，从而决定了观察到的聚集体特异性ThT荧光强度。这些结果揭示了纤维形态在基于ThT的淀粉样蛋白研究中的关键作用，强调了多态性对ThT-淀粉样蛋白相互作用的影响，可解释ThT淀粉样蛋白结合实验中常见的变异性现象。
关键词： 硫黄素T、多态性、淀粉样蛋白、原子力显微镜、α-突触核蛋白
更新于2025-09-04 15:30:14