基于抗EpCAM的免疫捕获实时分析：从分子到细胞的MP-SPR技术应用

摘要： 基于上皮细胞黏附分子抗体（抗EpCAM）的界面已被证明在捕获循环肿瘤细胞（CTCs）方面具有高效性。为实现抗EpCAM与界面的结合，采用生物素和链霉亲和素对表面进行修饰。这些过程对后续细胞捕获效率至关重要。然而，目前缺乏关于生物素、链霉亲和素与生物素化抗EpCAM在界面上相互作用的定量研究。本工作利用表面等离子体共振技术测定了生物分子相互作用的热力学和动力学参数。结果显示：生物素化抗EpCAM与链霉亲和素的平衡结合亲和力为2.75×10^6 M^-1，链霉亲和素与生物素（以生物素-PEG400-硫醇形式体现）的平衡结合亲和力为8.82×10^6 M^-1。在热力学平衡状态下，每个链霉亲和素最多可结合2.30个生物素化抗EpCAM。该发现为优化抗EpCAM修饰及提高CTCs捕获效率提供了重要依据。