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胰岛素和加压素中二硫键的直接紫外激光诱导还原
摘要： 紫外光（UV）已被证实可诱导溶液中二硫键的还原。该光还原过程被认为是由激发态酪氨酸（Tyr）或色氨酸（Trp）残基提供电子所致。本研究采用强紫外飞秒激光产生光还原产物，并通过光谱学与质谱技术验证Tyr/Trp介导假说。在280纳米波长下进行≤3分钟的有限照射后，激光诱导的精氨酸加压素和人胰岛素还原反应产生了约3%的显著稳定还原产物产率。光生巯基需酸性pH环境维持稳定，而中性pH主要导致分子重排及三硫键形成。值得注意的是，尚无直接证据表明Tyr/Trp介导是二硫键光还原的必要条件。虽然胰岛素可能存在分子间电子转移机制，但该机制在加压素中已被排除。我们提出：在溶液体系中紫外光诱导二硫键还原时，应更多考虑另一种机制——即二硫键直接吸收单个紫外光子。
关键词： 质谱法、光还原、二硫键、酪氨酸/色氨酸介导、飞秒激光、紫外线
更新于2025-09-23 15:19:57
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通过非共价到共价结合的级联相互作用实现选择性依赖介质的切换及连续近红外荧光开启响应，用于活细胞中血清白蛋白的检测
摘要： 蛋白质水平异常已被证实与疾病相关，因此蛋白质检测有助于临床诊断和治疗。然而，在包含其他非蛋白质生物分子的复杂生物系统中，蛋白质种类繁多且每种蛋白质浓度相对较低，开发具有高选择性和灵敏度的有效蛋白质检测方法仍具挑战性。本研究基于一种通过二硫键连接两个方酸菁分子的稳定染料SQSS，开发了一种新型自组装方法，用于水溶液和活细胞中血清白蛋白（SA）的高选择性、高灵敏度检测。SQSS能自组装成"紧密"聚集体，通过聚集淬灭和均质荧光共振能量转移（homoFRET）淬灭的协同作用，提供"惰性"二硫键并呈现极低背景荧光。 SQSS对SA的响应经历两个级联阶段：第一阶段中，SA通过非共价相互作用快速（30秒）驱动SQSS紧密聚集体解离为松散状态，使荧光适度增强——该松散状态下SQSS的二硫键具有反应活性；第二阶段中，SA的Cys34通过与活性二硫键共价结合缓慢诱导进一步解离，导致荧光持续增强且SQSS对SA形成不可被位点结合配体置换的标记。该SQSS自组装体系能在100%水相缓冲液中选择性检测SA，并呈现连续近红外（NIR）荧光开启响应。此外，SQSS在活细胞成像SA方面展现出应用潜力。 在含20%乙腈的水溶液中，SQSS同样形成松散聚集体。该体系中含巯基的谷胱甘肽（GSH）通过与二硫键相互作用引发解离，产生荧光开启响应。即使存在其他含巯基氨基酸，SQSS仍能选择性识别GSH。作为概念验证方法，这种通过多步相互作用实现的分子自组装，为高选择性、高信噪比的生物相关分子检测及活细胞成像提供了理想策略。
关键词： 方酸菁染料、二硫键、谷胱甘肽、活细胞成像、血清白蛋白、自组装、非共价与共价相互作用
更新于2025-09-09 09:28:46