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oe1(光电查) - 科学论文

27 条数据
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  • 使用Amnis? ImageStreamX Mark II成像流式细胞仪进行细胞形态的定量图像分析：与传统方法的比较

    摘要： 趋化作用是指细胞在化学引诱剂梯度引导下的定向迁移，在许多生理过程中发挥重要作用，例如中性粒细胞向炎症部位的募集。中性粒细胞通过G蛋白偶联受体（GPCRs）检测化学引诱剂。化学引诱剂刺激会激活多条信号通路来调控中性粒细胞的定向迁移。最近，我们发现了一个新的GPCR介导的PLCβγ/PKCβ/PKD1信号轴，该信号轴通过丝切蛋白磷酸酶SSH2调节丝切蛋白活性，并在中性粒细胞趋化过程中重塑肌动蛋白细胞骨架。未来，理解多条信号通路如何进行时空调控以精确控制趋化中性粒细胞前导端肌动蛋白细胞骨架的快速重塑将至关重要。

    关键词： 流式细胞术、明场成像、荧光成像

    更新于2025-09-23 15:23:52

  • 流式细胞术与微拉曼光谱技术：法罗湖及第勒尼安海（意大利西西里岛）贻贝Mytilus galloprovincialis（双壳纲：贻贝科）血细胞群体的鉴定

    摘要： 通过流式细胞术和微拉曼光谱分析两种技术，研究了来自西西里两个不同栖息地（法罗湖和第勒尼安海）的贻贝Mytilus galloprovincialis（双壳纲：贻贝科）血细胞群体的免疫学与结构特征。2017年11月期间分析了360只该种贻贝，根据采集地点分为两组等量样本（每组三份平行样品）：法罗湖捕获60只（A组），第勒尼安海捕获60只（B组）。观察到两栖息地贻贝种群存在若干差异，这些差异归因于水质参数（温度、盐度、溶解氧、pH值、铵离子、游离氯、总氯、总磷酸盐、正磷酸盐）变化所诱导的免疫参数紊乱。本研究对监测受第勒尼安海洋流强烈影响的法罗湖及海域环境状况具有重要意义——该湖以贻贝养殖闻名，属于具有重要研究价值的特殊生物群落复合体沿岸生境。此外，通过追踪高度可重复的拉曼生物分子特征，首次揭示了贻贝细胞结构组织存在显著差异性排列。

    关键词： 血细胞、双壳类免疫学、深海、贻贝Mytilus galloprovincialis、流式细胞术、拉曼光谱

    更新于2025-09-23 15:23:52

  • 细胞内Asante钾绿探针APG-2和APG-4的校准与特性分析

    摘要： 荧光离子探针对离子的响应受细胞内环境影响。为正确校准它们，必须使被测离子的细胞内外浓度相等。本工作的第一部分（计算部分）以钾离子为例，表明实现离子平衡的两个条件是：膜电位完全消散，且钾钠离子均具有高膜通透性。第二部分中，我们测试了多种离子载体在Jurkat和U937细胞中实现钾平衡的能力，发现缬氨霉素、尼日利亚菌素、短杆菌肽和哇巴因的组合最有效。第三部分将该方案应用于两种钾离子探针APG-4和APG-2。APG-4对钾敏感但荧光易受细胞体积影响，由于离子载体会导致细胞肿胀，校准缓冲液需添加50 mM蔗糖以维持恒定细胞体积。采取这些措施后，测得U937和Jurkat细胞的平均钾浓度分别为132 mM和118 mM。另一种探针APG-2对阳离子无选择性，但这一特性可能有用——因为[K?]+[Na?]总量决定了细胞内水量。

    关键词： 校准、离子载体、二乙基苯并噻唑磺酸4(3)、细胞内钾、细胞体积、缬氨霉素、ION钾绿、短杆菌肽、Asante钾绿、流式细胞术

    更新于2025-09-23 15:23:52

  • 通过荧光激活细胞分选技术快速鉴定功能性吡咯赖氨酰-tRNA合成酶

    摘要： 正交吡咯赖氨酰-tRNA合成酶/tRNACUA对及其变体为扩展遗传密码提供了有力工具，使得能够工程化具有自然界不存在的增强结构和功能的蛋白质。为了加速发现能够位点特异性地将非天然氨基酸引入蛋白质的新型吡咯赖氨酰-tRNA合成酶（PylRS）变体，本文报道了一种快速构建吡咯赖氨酰-tRNA合成酶文库的简化方案，利用荧光激活细胞分选技术筛选功能性PylRS突变体，并通过单一细菌菌株直接表达荧光蛋白报告基因对所选PylRS突变体进行后续验证。我们预计该方案可普遍适用于快速鉴定能够将多种非天然氨基酸引入蛋白质的功能性PylRS突变体。

    关键词： 非天然氨基酸、流式细胞术、诱变、琥珀密码子抑制、遗传密码扩展

    更新于2025-09-23 15:23:52

  • 流式细胞术可识别具有浆细胞样树突状细胞分化的髓系肿瘤中的一系列成熟阶段

    摘要： 背景：目前来源于浆细胞样树突状细胞（PDC）的肿瘤分为两大类：与髓系肿瘤相关的成熟PDC增殖（MPDMN）和母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤（BPDCN）；2016年WHO造血系统肿瘤分类仅认可BPDCN。我们报道7例高级别髓系肿瘤（MN）患者（多为急性白血?。?，其PDC分化谱系不符合MPDMN或BPDCN特征。方法：分析7例MN病例（骨髓/外周血原始细胞增多，流式细胞术检测显示CD56阴性PDC增殖占5-26%），包括5例急性髓系白血?。?例FAB M4亚型，2例未分类）、1例混合表型急性白血病及1例未分类MN。结果：6例通过白血病细胞CD34、CD45、CD123和CD304的可变表达显示PDC分化的免疫表型证据；4例外周血存在PDC群体。均不符合BPDCN临床或病理标准。4例急性白血病病例形态学检查显示PDC呈结节状或间质浸润。所有病例临床进程凶险，其中3例存在FLT3 ITD突变。结论：这些病例表明高级别MN（尤其是AML）可呈现PDC分化（伴或不伴单核细胞分化），其方式不同于MPDMN或BPDCN。存在幼稚PDC增殖的MN提示当前认知的PDC相关肿瘤谱系可能更广。

    关键词： 浆细胞样树突状细胞、流式细胞术、急性髓系白血病、髓系肿瘤、免疫表型

    更新于2025-09-23 15:22:29

  • 用于红细胞膜疾病流式细胞分析的伊红-5'-马来酰亚胺染料的稳定性

    摘要： 采用流式细胞术的伊红-5'-马来酰亚胺（EMA）结合试验是测量红细胞膜疾病患者EMA标记红细胞平均通道荧光值（MCF）降低的常用方法。该试验的基本原理是EMA与带3蛋白第一胞外环上赖氨酸-430位点形成共价结合。本研究分析了12名健康志愿者（对照组）样本的EMA-MCF值，以确定EMA在1年内的稳定性（即荧光强度下降百分比）。通过每2个月定期检测MCF发现：前6个月内平均通道荧光值无显著变化，但第8个月时出现明显下降。为保证染料最佳使用效果，EMA仅在6个月内保持稳定。因此建议实施本试验时每6个月重新配制染料，并在-80℃避光条件下保存。

    关键词： 流式细胞术，红细胞，遗传性球形红细胞增多症

    更新于2025-09-23 15:22:29

  • 具有生物偶联反应位点的荧光聚对苯撑乙烯共价包覆微球的制备与评价

    摘要： 基于流式细胞术的悬浮阵列技术对具有生物分子相互作用活性位点的荧光微球需求巨大。为开发新型荧光微球制备方法，本研究通过Sonogashira偶联反应合成两种含羧基侧链的聚对苯撑乙烯（PPE）共轭聚合物（CPs），经酯基水解后，利用羧基与氨基的偶联反应将其固定于单分散氨基修饰多孔聚甲基丙烯酸缩水甘油酯（APGMA）微球表面，制得APGMA-CP荧光微球。该微球表现出优异的光热稳定性及耐强洗涤特性，且内外层荧光发射均匀。为评估生物偶联效果，选用异硫氰酸荧光素标记牛血清白蛋白（BSA-FITC）作为模式生物分子进行偶联，获得APGMA-CP-BSA-FITC微球。流式细胞术分析中，通过单染微球实现V500与FITC检测器（分别接收405nm和488nm激发荧光）间的荧光补偿，消除FITC与CPs发射光谱干扰。最终APGMA-CP-BSA-FITC微球呈现CP与FITC双阳性标记（>95%），证实生物偶联高效性。本研究提供了一种简便的微球荧光标记与活性位点同步引入方法，有望成为高通量技术用荧光微球制备的通用策略。

    关键词： 荧光、生物偶联、流式细胞术、微球、共轭聚合物

    更新于2025-09-23 15:22:29

  • [分子生物学方法] 免疫耐受 第1899卷（方法与协议）|| 通过荧光激活细胞分选法分离人调节性T淋巴细胞

    摘要： 调节性T细胞（Tregs）是一类对免疫系统具有抑制作用的淋巴细胞群体。在人外周血中，具有抑制功能的主要T淋巴细胞群通过表达T细胞共受体CD4和白细胞介素-2受体α链（CD25），同时极低表达白细胞介素-7受体α亚基（CD127）来定义。我们首先概述通过离心覆盖于亲水性多糖上的全血分离外周血单个核细胞（PBMCs）的方法，并包含额外的红细胞裂解步骤。后续方案采用荧光激活细胞分选术（FACS）从免疫染色的PBMCs中分离出高产量、高纯度的CD4+CD25+CD127lo调节性T细胞群体。在进行FACS分选前，该方案利用磁珠免疫选择法对CD25+ PBMC进行预富集，从而缩短后续FACS分选的时长。

    关键词： 流式细胞术，荧光激活细胞分选，调节性T细胞，细胞分离，Treg细胞

    更新于2025-09-23 15:22:29

  • 使用吖啶橙对非洲爪蟾（Xenopus laevis）和热带爪蟾（X. tropicalis）血细胞进行流式细胞术分析

    摘要： 自动血细胞计数器可根据细胞大小及有无细胞核来区分细胞。但大多数脊椎动物的有核血细胞无法通过自动化设备计数。我们建立了一种替代性自动计数方法：用荧光染料吖啶橙（AO）对细胞进行染色，并通过流式细胞术（FCM）分析细胞群。作为极具前景的新型动物模型，我们选取了非洲爪蟾（Xenopus laevis）和热带爪蟾的三个近交品系。通过比较X. laevis与三个热带爪蟾近交品系的血液学表型（包括血细胞类型、细胞大小、细胞结构及红细胞寿命/更新率），发现每个X. laevis细胞类型均可根据六个参数进行分?。呵跋蛏⑸涔庥氩嘞蛏⑸涔馇慷取O红绿荧光强度以及细胞红绿荧光强度。值得注意的是，Golden品系的红细胞计数最高，提示遗传因素与血细胞相关。此外，贫血X. laevis中的未成熟红细胞能通过红色荧光强度与正常血细胞分离。这些结果表明，采用AO染色的FCM技术可实现对多种物种外周血细胞的精准分析。

    关键词： 热带爪蟾，流式细胞术，吖啶橙，血细胞，非洲爪蟾

    更新于2025-09-23 15:21:21

  • OMIP-0XX – 用于表征B细胞和髓系细胞的28色流式细胞术方案

    摘要： 该28色流式细胞术检测方案聚焦于B细胞、树突状细胞和单核细胞，并针对冷冻保存的外周血单个核细胞（PBMC）进行了优化。除用于分析单核细胞（CD14）及定义B细胞（CD10、CD19、CD20、CD21、CD27、IgD、IgM）和树突状细胞（CD1c、CD11c、CD123、CD141、HLA-DR）亚群的标志物外，我们还纳入了功能标志物，如趋化因子受体（CXCR3、CXCR5）、表面免疫球蛋白（IgA、IgD、IgG、IgM）、Fc受体（CD16、CD23、CD32、CD64）、抑制性分子（CD73、CD85j）、共刺激分子CD40以及细胞因子受体（IL-21R、BAFF-R、TACI），从而实现对B细胞、树突状细胞和单核细胞的深度表征。

    关键词： 28色panel，B细胞，树突状细胞，单核细胞，流式细胞术

    更新于2025-09-23 15:19:57