利用荧光偏振技术快速简便地定量重组蛋白

摘要： 生物技术使得重组蛋白能够实现生产与商业化应用，这些蛋白可用于诊断、治疗及研究领域。例如单克隆抗体如今已成为快速增长的市场，2013年其750亿美元的营业额占生物制药化合物业务的近半份额。蛋白质定量是优化细胞培养条件并确保生产流程各环节符合规范的重要工作。对于治疗性药物而言，精确可靠的剂量控制对避免患者不良反应至关重要。现有的ELISA或HPLC等分析技术耗时且通常需要预纯化处理。在此背景下，业界亟需一种能像天平称重般快速、精准、可靠、稳定且操作简便的蛋白质定量技术。为此，我们开发了一种重组蛋白快速定量检测方法。该方法基于荧光偏振技术，几乎无需样本预处理。当小分子特异性荧光配体与其重组目标蛋白（如单克隆抗体）结合时，其荧光各向异性增强从而实现定量检测。该检测无需预先分离生物培养物，操作简便程度堪比使用天平称重。通过定期采样并采用荧光偏振检测法，我们成功监测了大肠杆菌发酵过程中代表性His标签蛋白的生产情况。