研究目的
研究泛连接蛋白-1在典型与非典型炎症小体激活中的作用。
研究成果
Pannexin-1是驱动凋亡过程中NLRP3炎性小体组装所必需的，但对巨噬细胞中经典NLRP3或非经典炎性小体激活并非必需。
研究不足
该研究无法排除pannexin-1可能使小鼠内毒素休克模型在体内易感的可能性。
1：实验设计与方法选择：
采用三种不同的泛连接蛋白-1通道抑制剂和两系Panx1–/–巨噬细胞，提供遗传学与药理学证据。
2：样本选择与数据来源：
取自野生型（WT）和Panx1–/–小鼠的骨髓源性巨噬细胞（BMDMs）。
3：实验设备与材料清单：
泛连接蛋白-1通道抑制剂（丙磺舒、曲伐沙星、螺内酯）、ABT-737、S63845、TNF、AZD5582、LPS、尼日利亚菌素、ATP、MSU。
4：STNF、AZDLPS、尼日利亚菌素、ATP、MSU。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：在有无泛连接蛋白-1抑制剂条件下，用不同试剂刺激BMDMs以诱导凋亡或炎性小体激活。
5：数据分析方法：
免疫印迹法、LDH检测、IL-1β ELISA检测，使用GraphPad Prism 7软件进行统计分析。
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ABT-737
Selleckchem
Induces intrinsic apoptosis
-
S63845
Selleckchem
MCL1 inhibitor
-
TNF
PeproTech
Induces extrinsic apoptosis
-
AZD5582
Selleckchem
SMAC-mimetic
-
probenecid
Sigma
Pannexin-1 channel inhibitor
-
trovafloxacin
Sigma
Pannexin-1 channel inhibitor
-
spironolactone
Sigma
Pannexin-1 channel inhibitor
-
LPS
InvivoGen
Priming agent for inflammasome activation
-
nigericin
InvivoGen
Canonical NLRP3 inflammasome agonist
-
ATP
Sigma
Canonical NLRP3 inflammasome agonist
-
MSU
InvivoGen
Particulate NLRP3 inflammasome agonist
-
Pam3CSK4
InvivoGen
Priming agent for noncanonical inflammasome activation
-
Fugene HD
Promega
Transfection reagent
-
DMEM
Gibco
Cell culture medium
-
FCS
Bioconcept
Cell culture supplement
-
HEPES
Bioconcept
Cell culture supplement
-
penicillin/streptomycin
Bioconcept
Cell culture supplement
-
nonessential amino acids
Gibco
Cell culture supplement
-
Opti-MEM
Gibco
Cell culture medium
-
TaKaRa LDH cytotoxicity detection kit
Clontech
LDH assay
-
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