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β-葡萄糖苷酶的基质辅助脉冲激光蒸发(从多巴/醌靶材)

DOI:10.1016/j.enzmictec.2019.109414 期刊:Enzyme and Microbial Technology 出版年份:2020 更新时间:2025-09-12 10:27:22
摘要: β-葡萄糖苷酶(BG)在决定纤维素酶复合体将纤维素降解为糖的效率方面起着关键作用。它能水解纤维二糖——这种纤维素酶复合体的抑制剂。因此,BG的固定化对纤维素酶的工业应用是一大挑战。常规纤维素酶所含BG量通常不足以避免纤维二糖的抑制作用。本研究采用基质辅助脉冲激光蒸发(MAPLE)技术对BG进行固定化。所用冷冻基质由水、水/m-DOPA及水/m-DOPA/醌组成。通过研究确定了辅料对MAPLE处理后酶最终构象的影响。采用傅里叶变换红外光谱分析了酶的二级结构,并测试了沉积薄膜在纤维二糖水解反应中的催化性能。结果表明:m-DOPA的氧化形式(O-醌形式)能保护蛋白质天然结构,且激光诱导损伤极小甚至可忽略。事实上,仅从此类靶材沉积的样品保留了多肽链的二级结构,并能在连续四次运行中完全水解纤维二糖,显示出该生物催化剂的高操作稳定性。
作者: Giovanni Ausanio,Valeria Califano,Antonio Aronne,Giovanni Piero Pepe,Filomena Sannino,Luciano R.M. Vicari,Aniello Costantini,Giuseppe Perretta
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研究概述 实验方案 设备清单

研究采用基质辅助脉冲激光蒸发(MAPLE)技术固定化β-葡萄糖苷酶(BG),以提高纤维素酶复合物将纤维素降解为糖的效率。

该研究成功利用MAPLE技术实现了β-葡糖苷酶的固定化,其中m-DOPA/醌基质有效保持了酶的天然结构与活性。该方法为酶固定化提供了一种新途径,在工业生物催化领域(尤其是纤维素降解过程)具有应用潜力。

该研究强调需要进一步优化MAPLE参数,以最小化酶变性并提高沉积效率。虽然固定化酶的操作稳定性前景良好,但可通过共价固定化策略进一步增强。

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