研究目的
阐明585 nm LED通过NHEKs及其外泌体的旁分泌作用发挥抑黑素生成活性的可能体外机制。
研究成果
该研究表明，585纳米LED可通过上调NHEK细胞中H19及其衍生的外泌体miR-675来抑制黑色素生成，提示其作为调控黑色素生成的新型旁分泌因子。这为色素沉着性疾病提供了新的治疗途径。
研究不足
该研究聚焦于585纳米LED对正常人表皮角质形成细胞和黑素细胞的体外效应。相关发现需通过体内实验验证。此外，LED上调H19/miR-675轴的确切机制仍有待充分阐明。
1：实验设计与方法选择：
本研究评估了585纳米LED对NHEK细胞及其对黑素细胞的旁分泌效应。通过用不同光剂量的585纳米LED照射NHEK细胞，检测细胞活力、凋亡以及H19和miR-675的表达水平。随后利用经照射的NHEK细胞条件培养基培养黑素细胞，测定黑色素含量、酪氨酸酶活性及黑素生成酶活性。
2：样本选择与数据来源：
NHEK细胞和NHEM细胞取自人包皮组织标本。
3：实验设备与材料清单：
585纳米发光二极管装置（KN-7000D，Kernel Medical，中国）、细胞计数试剂盒-8、含Annexin-V FITC和PI的死细胞凋亡检测试剂盒、TRIZOL试剂、exoRNeasy试剂盒及Western blotting所需各类抗体。
4：含Annexin-V FITC和PI的死细胞凋亡检测试剂盒、TRIZOL试剂、exoRNeasy试剂盒及Western blotting所需各类抗体。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：用585纳米LED照射NHEK细胞并评估其活力与凋亡情况，继而使用条件培养基培养黑素细胞，测定黑色素含量、酪氨酸酶活性及黑素生成酶活性。分离鉴定外泌体并分析H19和miR-675表达水平。
5：数据分析方法：
采用SPSS软件进行统计分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。
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获取完整内容-
585-nm light-emitting diodes device
KN-7000D
Kernel Medical
Used to irradiate NHEKs with 585 nm light to study its effects on melanogenesis.
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Cell Count Kit-8 assay
Dojindo
Used to evaluate the cell viability of NHEKs after irradiation.
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Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin-V FITC and PI
Thermo Fisher Scientific
Used to assess the apoptotic nature of NHEKs after irradiation.
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TRIZOL
Invitrogen
Used to isolate total RNA from NHEKs.
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exoRNeasy Kit
Qiagen
Used to extract exosomal RNA from NHEKs medium.
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Multiskan GO reader
ThermoFisher
Used to measure the OD value for cell viability and tyrosinase activity assays.
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Zetaview Particle Tracking Analyzer
PMX 110
Particle Metrix
Used to detect the particle size and concentration of isolated exosomes.
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