研究目的
通过检查视锥细胞内节超微结构,量化退化视锥细胞中线粒体易位的印象,并确定视网膜下间隙中具有明显内节(IS)样特征的积聚物质的性质。
研究成果
在AMD中,如所述,除视杆细胞外节缺失外,黄斑视锥细胞还因内节缩短而出现可检测肌原纤维丢失。线粒体发生萎缩并向细胞核迁移。作为反射源,迁移的线粒体可能通过活体成像被检测到,从而监测视网膜疾病中的光感受器退化。这些结果增进了对高分辨率临床视网膜影像解读的知识基础。
研究不足
透射电子显微镜和大多数组织学分析仅使用了单一切片。尽管与多数使用人体组织的研究相比,死亡与保存之间的时间间隔较短,但线粒体形态并不理想。然而,常用于研究光感受器退化的动物模型既没有富含视锥细胞的黄斑(负责色觉和高分辨率视觉),也没有人类黄斑典型的长亨勒纤维光感受器。本研究中的眼睛未获得生前临床影像资料。
1:实验设计与方法选择:
筛选具有晚期年龄相关性黄斑变性(AMD)的供体眼,在全视网膜高分辨率数字切片中观察外层视网膜管状结构(ORT)。通过透射电子显微镜对AMD眼中ORT内的退化视锥细胞(ORT视锥)和ORT外的非ORT视锥,以及年龄匹配对照眼中的正常视锥细胞进行成像。
2:样本选择与数据来源:
研究用眼取自阿拉巴马眼库,死亡至保存的中位时间为2小时40分钟。
3:实验设备与材料清单:
眼球经前段切除后,保存于含1%多聚甲醛和2.5%戊二醛的0.1 M磷酸盐缓冲液中直至使用。组织经锇酸-单宁酸-对苯二胺后固定以增强细胞外中性脂质显示,并包埋于环氧树脂(Polybed 812;美国宾夕法尼亚州沃灵顿Polysciences公司)。
4:5%戊二醛的1 M磷酸盐缓冲液中直至使用。组织经锇酸-单宁酸-对苯二胺后固定以增强细胞外中性脂质显示,并包埋于环氧树脂(Polybed 812;美国宾夕法尼亚州沃灵顿Polysciences公司)。 实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:制作通过中央凹及距中央凹中心上方2毫米处(近视杆细胞峰值区)的水平向0.8微米厚全视网膜切片,甲苯胺蓝染色。
5:8微米厚全视网膜切片,甲苯胺蓝染色。 数据分析方法:
5. 数据分析方法:测量线粒体至外界膜(ELM)的距离、视锥内节长度及外界膜处视锥内节宽度。
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