研究目的
使用海德堡视网膜断层扫描仪罗斯特克角膜?？椋℉RT-RCM）评估全层角膜损伤后角膜细胞的后向散射、排列、形态及连接情况，并将这些发现与整体三维（3-D）共聚焦荧光及二次谐波成像（SHG）结果进行关联。
研究成果
改良后的HRT-RCM可实现对角膜亚层厚度的活体测量、细胞形态与排列及连接性的评估，以及伤口愈合过程中基质后向散射（雾状混浊）的估算。值得注意的是，在伤口愈合期间，重新定植受损组织的基质细胞会呈现细长且相互连接的成纤维细胞形态，尤其在角膜后部区域，无论是活体还是离体状态下，常能观察到平行排列且相互连接的角膜成纤维细胞流。这种成纤维细胞排列模式与角膜板层结构组织高度相关，提示存在基质内细胞迁移的接触引导现象。
研究不足
使用HRT-RCM进行重复CMTF扫描时遇到的一个问题是：物镜与Tomocap后表面之间的Genteal凝胶层会随时间逐渐消散并向下移位。若该凝胶层移至光轴下方，图像强度就会降低。另一个问题是：平坦的压平头端（Tomocap）在临床成像过程中可能产生压缩伪影，导致细胞结构变形。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用活体共聚焦显微镜（HRT-RCM）及离体共聚焦荧光显微镜与SHG成像技术，评估角膜伤口愈合过程中成纤维细胞的迁移模式。
2：样本选择与数据来源：
对兔角膜在角膜冷冻损伤（FI）前后进行活体扫描，并对角膜组织进行整体固定及f-肌动蛋白与细胞核标记。
3：实验设备与材料清单：
海德堡视网膜断层扫描仪罗斯特克角膜?？椋℉RT-RCM）、徕卡SP8共聚焦显微镜、配备变色龙多光子激光器的蔡司LSM 510共聚焦显微镜、Alexa Fluor 488鬼笔环肽、DAPI。
4：实验流程与操作步骤：
在角膜冷冻损伤前后进行活体扫描，组织经固定、标记后采用共聚焦荧光显微镜与SHG成像技术观察。
5：数据分析方法：
使用自主开发的CMTF软件进行三维可视化与定量分析，通过ImageJ软件中的"方向性"插件量化细胞与基质的排列方向。
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