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基于抗EpCAM的免疫捕获实时分析:从分子到细胞的MP-SPR技术应用

DOI:10.1021/acs.langmuir.8b03898 期刊:Langmuir 出版年份:2019 更新时间:2025-09-23 15:23:52
摘要: 基于上皮细胞黏附分子抗体(抗EpCAM)的界面已被证明在捕获循环肿瘤细胞(CTCs)方面具有高效性。为实现抗EpCAM与界面的结合,采用生物素和链霉亲和素对表面进行修饰。这些过程对后续细胞捕获效率至关重要。然而,目前缺乏关于生物素、链霉亲和素与生物素化抗EpCAM在界面上相互作用的定量研究。本工作利用表面等离子体共振技术测定了生物分子相互作用的热力学和动力学参数。结果显示:生物素化抗EpCAM与链霉亲和素的平衡结合亲和力为2.75×10^6 M^-1,链霉亲和素与生物素(以生物素-PEG400-硫醇形式体现)的平衡结合亲和力为8.82×10^6 M^-1。在热力学平衡状态下,每个链霉亲和素最多可结合2.30个生物素化抗EpCAM。该发现为优化抗EpCAM修饰及提高CTCs捕获效率提供了重要依据。
作者: Su Gao,Shuangshuang Chen,Qinghua Lu
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研究概述 实验方案 设备清单

定量研究生物分子相互作用(生物素、链霉亲和素及生物素化抗EpCAM抗体)在界面上的热力学与动力学特性,以优化抗EpCAM修饰并提升循环肿瘤细胞捕获效率。

MP-SPR技术能有效追踪生物分子相互作用与细胞捕获过程,提供关键的热力学与动力学参数。研究表明链霉亲和素结合受生物素密度影响,优化该参数可提升抗EpCAM固定化效果及循环肿瘤细胞捕获效率。这种可视化方法填补了实时监测的技术空白,为后续优化提供了可靠数据支撑。

高生物素密度可能导致空间位阻,降低链霉亲和素的结合。该方法仅限于体外条件,可能无法完全复现体内环境。为实际应用,需优化生物素的固定化。

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