研究目的
定量研究生物分子相互作用(生物素、链霉亲和素及生物素化抗EpCAM抗体)在界面上的热力学与动力学特性,以优化抗EpCAM修饰并提升循环肿瘤细胞捕获效率。
研究成果
MP-SPR技术能有效追踪生物分子相互作用与细胞捕获过程,提供关键的热力学与动力学参数。研究表明链霉亲和素结合受生物素密度影响,优化该参数可提升抗EpCAM固定化效果及循环肿瘤细胞捕获效率。这种可视化方法填补了实时监测的技术空白,为后续优化提供了可靠数据支撑。
研究不足
高生物素密度可能导致空间位阻,降低链霉亲和素的结合。该方法仅限于体外条件,可能无法完全复现体内环境。为实际应用,需优化生物素的固定化。
1:实验设计与方法选择:
采用多参数表面等离子体共振(MP-SPR)技术实时监测生物分子相互作用及细胞捕获过程。理论模型包含用于结合亲和力计算的Langmuir等温线。
2:样本选择与数据来源:
样本包括生物素-PEG400-硫醇、链霉亲和素、生物素化抗EpCAM抗体及MCF-7癌细胞。数据源自SPR传感器图谱。
3:实验设备与材料清单:
MP-SPR Navi 200仪器、金芯片、生物素-PEG400-硫醇、链霉亲和素、生物素化抗EpCAM抗体、PBS缓冲液、DMEM培养基、胎牛血清等。
4:实验流程与操作步骤:
包括金芯片清洗、生物素-PEG400-硫醇自组装、链霉亲和素结合、生物素化抗EpCAM抗体固定及癌细胞捕获,全程通过SPR监测并控制流速与温度。
5:数据分析方法:
使用MP-SPR NaviTM Dataviewer和TraceDrawer软件分析动力学常数与结合亲和力。
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获取完整内容-
Dulbecco’s modified Eagle medium
DMEM
Gibco
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MP-SPR Navi 200
Navi 200
BioNavis Ltd
Multi-parameter surface plasmon resonance device for real-time monitoring of biomolecular interactions and cell capture.
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Gold chip
BioNavis Ltd
Sensor slide coated with 50 nm Au layer and 2 nm Cr adhesive layer for SPR measurements.
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