研究目的
开发一种基于结合介导的DNA保护和双链DNA激活荧光团EBCB的新型传感平台，用于监测蛋白质-配体相互作用并检测蛋白质活性。
研究成果
该策略能有效以高选择性和灵敏度监测蛋白质-配体相互作用及蛋白质活性，可用于检测蛋白质变性，且在复杂样本中具有应用潜力。EBCB在生化传感与成像领域展现出更广泛的应用前景。
研究不足
该方法可能受限于所使用的蛋白-配体对（如链霉亲和素-生物素）的特异性，以及在复杂样本中可能存在的干扰。不同系统需要优化条件，且该方法的实施依赖于酶活性，而酶活性可能受到环境因素的影响。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用基于荧光检测的平台，其中标记配体（如生物素）的发夹DNA探针与目标蛋白（如链霉亲和素）结合，保护DNA免受核酸外切酶III的降解。通过双链DNA连接的荧光团EBCB，利用荧光变化检测DNA构象改变。
2：样本选择与数据来源：
DNA序列购自生工生物工程股份有限公司。使用的蛋白包括链霉亲和素、牛血清白蛋白、前列腺特异性抗原和人血清白蛋白。EBCB按既往文献方法合成。
3：实验设备与材料清单：
设备包含用于荧光测量的PTI ASOC-10荧光分光光度计、Millipore纯水系统及用于凝胶电泳的ChemiDoc XRS+成像系统。材料包括DNA探针、EBCB、核酸外切酶III、蛋白及缓冲液。
4：实验流程与操作步骤：
包括DNA与蛋白及Exo III孵育、加入EBCB并测量荧光。通过凝胶电泳验证DNA?；ばЧ?。优化了EBCB浓度、温度、Exo III用量及消化时间等条件。
5：数据分析方法：
使用荧光分光光度计分析荧光光谱，绘制数据图以确定线性范围和检测限。统计分析包括计算加标样本的回收率。
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获取完整内容-
PTI ASOC-10 fluorospectrophotometer
ASOC-10
Photo Technology International
Used for performing fluorescence spectra measurements.
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Millipore purification system
Millipore
Used to produce ultrapure water with 18.2 MΩ resistivity.
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ChemiDoc XRS+ imaging system
XRS+
Bio-RAD
Used for visualizing gel electrophoresis results.
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Exonuclease III
Fermentas
Used to hydrolyze nucleotides from the 3?-terminus of dsDNA.
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DNA sequences
Sangon Biotech
Used as probes in the experiments.
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EBCB
Used as a dsDNA-lighted fluorophore for fluorescence detection.
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Proteins (SA, BSA, PSA, HSA)
Dingguo Biotech
Used as target and control proteins in interaction studies.
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DMEM
Sigma-Aldrich
Used as a complex fluid sample for spiking and recovery tests.
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