研究目的
通过开发多功能纳米颗粒递送维替泊芬作为替莫唑胺化疗的辅助疗法,克服血脑屏障并提高选择性和疗效,从而改善多形性胶质母细胞瘤的治疗效果。
研究成果
多功能普朗尼克P85/F127纳米颗粒可实现维替泊芬与替莫唑胺的靶向递送,在联合光动力疗法与化疗中表现出癌细胞选择性摄取及协同细胞毒性。该方法降低替莫唑胺剂量、减少副作用并克服耐药机制,为改善胶质母细胞瘤治疗展现出前景。
研究不足
m-NPs在液相中因稳定性问题保质期有限(约三个月),需冻干处理以实现长期储存。较高浓度的TMZ可能破坏纳米颗粒稳定性并降低协同效应。该研究为体外实验,未探索体内应用,可能限制临床转化。光照剂量与药物比例需优化以达到最佳疗效。
1:实验设计与方法选择:
合理设计多功能Pluronic P85/F127纳米颗粒(m-NPs),其中包含用于靶向的生物素和用于诊疗的罗丹明-B。方法包括功能化聚合物的合成、通过薄膜水化法制备纳米颗粒、物理化学性质表征、稳定性研究、体外细胞摄取和细胞毒性测定以及细胞周期分析。
2:样本选择与数据来源:
来自ATCC的人胶质母细胞瘤细胞系(T98 - G、U87 - MG、U343)和正常成纤维细胞系(NIH - 3T3)。药物:维替泊芬(VP)和替莫唑胺(TMZ)。
3:实验设备与材料清单:
设备包括用于测量粒径和zeta电位的Zetasizer Nano ZS、紫外 - 可见分光光度计(GE Ultrospec 7000)、共聚焦显微镜(Leica TCS SP8)、流式细胞仪(Guava easyCyte 8HT)、扫描电子显微镜(Carl Zeiss Evo 50)、原子力显微镜(Shimadzu SPM - 9600)、用于稳定性研究的LUMiSizer以及旋转蒸发仪(Buchi Rotavapor R - 215)。材料包括Pluronic共聚物(F127、P85)、生物素、罗丹明B、VP、TMZ、海藻糖和细胞培养试剂。
4:0)、共聚焦显微镜(Leica TCS SP8)、流式细胞仪(Guava easyCyte 8HT)、扫描电子显微镜(Carl Zeiss Evo 50)、原子力显微镜(Shimadzu SPM - 9600)、用于稳定性研究的LUMiSizer以及旋转蒸发仪(Buchi Rotavapor R - 215)。材料包括Pluronic共聚物(FP85)、生物素、罗丹明B、VP、TMZ、海藻糖和细胞培养试剂。 实验步骤与操作流程:
4. 实验步骤与操作流程:合成罗丹明标记的P85和生物素标记的F127,通过薄膜水化法制备m - NPs,包封效率测量,在BSA和冻干条件下的稳定性测试,体外释放研究,细胞培养和摄取实验,有和没有光照的细胞毒性测定,联合治疗研究,以及通过流式细胞术进行细胞周期分析。
5:数据分析方法:
使用GraphPad Prism进行统计分析,采用方差分析(ANOVA)和Tukey检验,使用CompuSyn软件通过Chou - Talalay法评估协同效应,数据以平均值±标准差表示。
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Zetasizer Nano ZS
Nano ZS
Malvern Instruments
Measure hydrodynamic diameter, polydispersity index, and zeta potential of nanoparticles
-
Confocal Microscope
TCS SP8
Leica Microsystems
Image subcellular distribution of nanoparticles and drugs
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SEM
Evo 50
Carl Zeiss
Image morphology of lyophilized nanoparticles
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AFM
SPM-9600
Shimadzu
Analyze nanoparticle size and shape
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LUMiSizer
611
LUM GmbH
Accelerated stability studies of nanoparticle dispersions
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Laser
Brilliant B Nd-YAG Q-switched
Quantel
Irradiate cells for photodynamic therapy
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UV-Vis Spectrophotometer
Ultrospec 7000
GE Healthcare
Quantify drug encapsulation efficiency and release profiles
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Flow Cytometer
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Millipore
Assess cell viability and cell cycle analysis
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Remove solvent during nanoparticle preparation
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Lyophilize nanoparticle formulations for storage
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