研究目的
开发用于NIR-II窗口三维细胞成像的共聚焦激光扫描显微镜,并展示其深层组织穿透能力。
研究成果
所开发的近红外二区共聚焦显微镜在生物样本中可实现深达800微米、在人工散射介质中可达3.5毫米的深层组织成像,并具有高空间分辨率。未来改进方向可能包括更优质的光学元件、自适应光学技术及额外的背景抑制方法,以进一步提升穿透深度和图像质量。
研究不足
该系统基于改进的可见光共聚焦装置,可能对NIR-II光的传输效果欠佳;光电探测器暗计数较高;IR-1061等有机染料量子产率低;样品像差和光漂白会降低信号质量;背景噪声可能淹没深层微弱信号。
1:实验设计与方法选择:
改装尼康C1共聚焦系统用于近红外二区波长,采用脉冲激光二极管和门控铟镓砷/磷化铟单光子探测??榇砣豕庑藕挪⒔档驮肷?。
2:样本选择与数据来源:
使用铅硫量子点标记的HeLa细胞及IR-1061染料标记的鸡软骨组织,按特定固定染色方案制备。
3:实验设备与材料清单:
包含激光二极管、探测???、光纤、物镜及脂凡明溶液等样本。
4:实验流程与操作规范:
对细胞和组织进行标记、封片及成像,通过优化检测宽度、激光脉冲参数等实现成像;采用z轴堆叠扫描进行三维重建。
5:数据分析方法:
利用尼康NIS-Elements软件和ImageJ获取处理图像并进行三维渲染,通过指数拟合分析信号衰减。
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Laser Diode
LU0808M250
Lumics GmbH Berlin
Excitation light source for fluorescence imaging
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Single-Photon Detection Module
id201
id Quantique
Detection of NIR-II fluorescence emissions at single-photon level
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Pulsed Laser Diode Driver
ALPLDC001
ALPHANOV
Driving the laser diode with nanosecond pulses and providing synchronization triggers
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Objective Lens
40X/0.8 NIR water dipping
Nikon
Focusing excitation light and collecting fluorescence from samples
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Confocal Microscope
Nikon C1
Nikon
Base system modified for NIR-II imaging, including scanning and control
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Optical Fiber
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Coupling fluorescence emissions to the detection module for improved light collection
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Dichroic Mirror
1050nm long pass
Reflecting excitation light and transmitting fluorescence emissions
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Emission Filter
900nm long pass
Filtering out excitation light and passing NIR-II emissions
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Quantum Dots
PEG-NH2 PbS QDs
Creative Diagnostics
Fluorescent labeling agent for cells with NIR-II emission
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Organic Dye
IR-1061
Sigma
Fluorescent labeling agent for cell membranes in NIR-II range
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Lipofundin
Scattering medium to simulate biological tissue properties
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