研究目的
开发一种用于监测活细胞内源性次氯酸的比率荧光探针。
研究成果
ZOC是一种高效且具有新颖识别机制的次氯酸根比率型探针,适用于活细胞中的实时检测。
研究不足
该探针对溶酶体和脂滴的靶向性高于线粒体,这可能限制其在线粒体特异性应用中的使用。该研究是在体外和细胞系中进行的,未探索体内应用。
1:实验设计与方法选择:
基于FRET和ICT平台,以香豆素为供体、吡啶鎓为受体设计探针ZOC。合成过程包括缩合与环化等多步有机反应,通过荧光及紫外-可见光谱进行表征检测。
2:样本选择与数据来源:
合成并表征探针ZOC。次氯酸盐溶液及其他分析物(活性氧/氮物种、离子)均采用市售化学品配制,生物成像选用RAW 264.7细胞。
3:7细胞。 实验仪器与材料清单:
3. 实验仪器与材料清单:仪器包含布鲁克Avance 300 MHz核磁共振仪、安捷伦Q-TOF6510质谱仪、日立U-4100紫外-可见分光光度计、VERTEX 70傅里叶变换红外光谱仪、XD-4熔点仪、PHS-3C pH计、珀金埃尔默LS-55荧光分光光度计及LSM 700共聚焦显微镜;材料包括硅胶、溶剂(二氯甲烷、乙醇、乙腈等)及分析物配制用化学品。
4:实验流程与操作步骤:
ZOC合成通过薄层色谱监测逐步反应,经柱层析纯化。光谱测量在PBS-乙醇缓冲液中进行,细胞成像包含RAW 264.7细胞培养、探针与刺激物孵育及共聚焦显微观察。
5:7细胞培养、探针与刺激物孵育及共聚焦显微观察。 数据分析方法:
5. 数据分析方法:计算荧光比值(I478/I610),采用3σ/s法确定检测限,能量转移效率按E=1-FDA/FD计算,细胞成像统计分析包含均值与标准差。
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