原黄素敏化光反应可有效诱导异常朊蛋白的分子间交联

摘要： 在朊病毒疾病中，由异常朊蛋白（PrPSc）组成的感染性致病颗?；嵩谀阅诶刍?。PrPSc的生化特征表现为其蛋白酶抗性核心（PrPres），但其结构特征尚未完全阐明。本研究报道了一种具有光敏活性的荧光染料金莲橙，它能显著增强紫外线照射诱导的SDS抗性PrPSc/res寡聚体形成——这种寡聚体可通过感染朊病毒的样本免疫印迹分析检测到。该寡聚体形成过程特异性针对PrPSc/res（而非正常朊蛋白），且在使用纯化PrPSc/res及未纯化材料时均得到验证。寡聚体形成呈现剂量依赖性（与金莲橙浓度相关）和时间依赖性（与紫外线照射时长相关）。尿素或甲酸处理均不能使寡聚体解离为单体，芳香族氨基酸的存在也不影响寡聚体形成。通过系列抗朊蛋白抗体分析发现：针对PrPres N端区域的抗体在二聚体中的反应性低于单体。这些结果表明，金莲橙增敏的光反应促进了PrPSc/res分子在PrPres N端疏水区域的分子间交联。在筛选其他化合物时发现，荧光素等光反应性化合物虽能产生类似但较弱的寡聚体促进作用。这类化合物增强的光反应将有助于评估PrPSc/res的结构特征，特别是PrPSc/res分子间的相互作用。