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oe1(光电查) - 科学论文

34 条数据
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  • 基于绿色荧光蛋白的葡萄糖指示剂可报告活细胞中的葡萄糖动态变化

    摘要： 葡萄糖是生物体最重要的能量来源。本研究开发了一系列基于单荧光蛋白（FP）的葡萄糖指示剂，命名为"绿色Glifons"，用于解析能量代谢相关分子间的层级与互作关系。三种指示剂对葡萄糖表现出不同的EC50值（50微米、600微米和4000微米），响应葡萄糖时产生约7倍的荧光强度变化。这些指示剂可可视化活体HeLa细胞胞质、质膜、细胞核及线粒体中的葡萄糖动态，也能在秀丽隐杆线虫咽肌中实现活体成像，并能检测小鼠血糖水平。最终，该指示剂适用于双色成像，揭示了小鼠胰腺MIN6 m9β细胞中葡萄糖与Ca2+的动态相互作用。我们认为这些指示剂将促进能量代谢的活体多色成像研究。

    关键词： 生物传感器、人工甜味剂、双色成像、秀丽隐杆线虫、活细胞成像、葡萄糖、血糖水平、荧光蛋白

    更新于2025-11-21 11:24:58

  • 通过改进的FRET/FLIM分析方法测量活细胞中转录因子Nrf2与其负调控因子Keap1的相互作用

    摘要： 转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）及其主要负调控蛋白Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）构成了一套分子效应与传感系统，通过协调全面的细胞?；こ绦颍韵赴趸乖忍娜哦鞒銮啃煊?。在稳态条件下，Nrf2是一种短寿命蛋白，会被靶向泛素化及蛋白酶体降解。当遇到亲电试剂、氧化剂或促炎刺激时，Keap1中的半胱氨酸传感器会发生化学修饰，导致其无法靶向降解Nrf2，进而使该转录因子积累并增强细胞保护基因的转录。虽然通过多种体外系统已深入解析了Nrf2与Keap1的蛋白互作关系，但能在活细胞环境中评估这些互作的检测方法却很少。我们先前开发了基于成像的FLIM/FRET技术来可视化和测量单细胞中Nrf2与Keap1的相互作用。本研究旨在改进该方法以提高通量与精度，并降低细胞间差异性。为消除方向偏倚可能性，我们在Keap1与FRET受体荧光蛋白标签间引入了柔性连接肽；为确保Nrf2-FRET供体荧光蛋白标签的正确成像，采用sfGFP作为FRET供体使其成熟时间与内源性Nrf2半衰期匹配。全局分箱法提升了检测通量，而分析过程中纳入实测仪器响应函数则提高了精度。应用该方法发现结果与受体表达水平存在强共变关系，通过考虑受体水平可规避细胞间差异性，从而增强活细胞中Keap1-Nrf2相互作用测量的灵敏度。

    关键词： FRET（荧光共振能量转移）、活细胞成像、荧光寿命、FLIM（荧光寿命成像显微镜）、sfGFP（超折叠绿色荧光蛋白）、蛋白质-蛋白质相互作用、全局合并、Keap1（Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1）、仪器响应函数、Nrf2（核因子E2相关因子2）

    更新于2025-11-21 11:08:12

  • 具有氧化还原非惰性ONS供体偶氮酚配体的发光铼(I)羰基配合物：合成、X射线结构、光物理性质及活细胞成像

    摘要： 本文合成了一种新型荧光铼(I)羰基配合物1，其核心为{Re(CO)3}+单元，配体为含氮氧硫供体的偶氮酚类氧化还原非惰性硫醚配体。单晶X射线衍射证实该配合物呈扭曲八面体几何构型。乙腈溶液中的循环伏安曲线显示不可逆氧化峰（Epa=1.36 V）及准可逆还原峰（E1/2=-0.92 V，ΔE=210 mV）。该配合物在525 nm处呈现低能发射带，具有高荧光量子产率（Φ=0.115）。通过MTT法测定其对人乳腺癌细胞系(MCF-7)的细胞毒性，IC50值为23.6 μM。当配合物浓度为10 μM时，荧光显微镜下可观察到MCF-7细胞系明亮的绿色荧光图像。

    关键词： 电化学、ONS供体配体、MTT检测法、铼(I)羰基配合物、活细胞成像

    更新于2025-11-19 16:46:39

  • 《分子生物学方法》自噬卷1880（方法与实验方案）|| 自噬体的关联光学与电子显微镜技术

    摘要： 活细胞成像技术已被广泛应用于研究自噬体的生物发生和成熟过程。当与关联电子显微镜技术结合使用时，该方法可进一步揭示三维结构中的超微细节。在研究膜接触位点及细胞器间管状连接时，则需要借助电子显微镜的分辨率优势。

    关键词： 自噬体、吞噬泡、电子断层扫描、活细胞成像、连续切片法

    更新于2025-09-23 15:23:52

  • [分子生物学方法] T细胞运动学 第1930卷（方法与实验方案）|| 实时活细胞成像与分析技术捕捉T细胞运动动态

    摘要： T淋巴细胞是免疫防御系统的主要协调者，在?；せ宓钟腥?、非己入侵物及恶性肿瘤方面发挥关键作用。为启动免疫应答，T细胞需有效迁移至感染或炎症组织部位，并与抗原呈递细胞（APCs）或恶性细胞建立接触。阐明T细胞向募集位点定向迁移的机制将为治疗提供新思路。显微镜技术的硬件与软件升级催生了多种高效易用的活细胞成像平台。本方案提供了一种通用且易于操作的T细胞迁移活细胞成像流程，该方案同样适用于细胞内信号传导事件的实时追踪观察。

    关键词： 高级显微镜技术、细胞追踪、活细胞成像、T细胞迁移

    更新于2025-09-23 15:23:52

  • 基于硫醇-烯"点击"化学制备的聚硅氧烷超支化荧光材料作为潜在的细胞成像聚合物

    摘要： 超支化聚合物因其独特的性能（具有优异的折射率和热稳定性）而受到越来越多的关注，已广泛应用于药物递送、催化剂、液晶等领域。本文通过硫醇-烯"点击"化学合成了基于聚硅氧烷的超支化荧光材料（P1和P2）。随后，通过稀土离子配位制备了新型基于聚硅氧烷的超支化荧光材料（P1-Ln3+）。鉴于P1-Ln3+出色的荧光特性和良好的稳定性，其已被应用于生物成像。P1-Ln3+在生物成像中获得了值得称赞的应用。

    关键词： 荧光材料、活细胞成像、超支化聚合物、硫醇-烯"点击"化学、配位、稀土离子

    更新于2025-09-23 15:23:52

  • 一种基于寡噻吩-茚二酮的比色和荧光传感器，用于真实样品中氰化物的快速高灵敏检测及活细胞生物成像

    摘要： 一种新型简单的基于寡噻吩-茚二酮的传感器3TI被合成，用于在70%水介质中高反应性、高选择性检测氰根离子（CN?）。由于CN?与3TI中缺电子的茚二酮-乙烯基团发生加成反应，阻碍了分子内电荷转移（ICT）效率，传感器3TI对CN?显示出明显的比色和荧光检测效果。通过光学测量、1H NMR滴定、FTIR光谱、HRMS分析和TD-DFT计算，证实了3TI对CN?的识别机制。该传感器3TI在检测CN?方面表现出卓越的优势：高荧光亮度、快速响应时间（30秒）、低检测限（31.3 nM）、在生理相关pH范围内最小依赖性，以及在其他竞争性阴离子存在下优异的选择性?；谡庑├硐氲拇行阅?，3TI已成功用于实际水和食品样品中CN?的测定、基于硅胶的传感试剂盒以及在活细胞中的荧光成像，并取得了令人满意的结果。

    关键词： 荧光传感器，氰化物，寡噻吩并茚二酮，比色传感器，实际样品，活细胞成像

    更新于2025-09-23 15:23:52

  • 一种用于可视化质膜不同区室中EphA4活性的基因编码FRET生物传感器

    摘要： EphA4受体酪氨酸激酶因其在发育、癌症进展和神经系统疾病中的关键作用而广为人知。然而，EphA4激酶活性如何在时间和空间上受到调控仍不清楚。为了可视化不同膜微区中EphA4的活性，我们基于荧光共振能量转移（FRET）技术开发了一种灵敏的EphA4生物传感器，并将其靶向于质膜中类脂筏微区内或外。我们证明，无论是体外还是在活细胞中，该生物传感器在EphA4激活时都能产生强烈且特异的FRET响应。有趣的是，我们观察到非脂筏靶向生物传感器的FRET响应强于脂筏靶向生物传感器，这表明更强的EphA4激活可能发生在非脂筏区域。进一步研究发现，肌动蛋白细胞骨架在抑制类脂筏微区中EphA4活性方面具有重要作用。因此，我们基于FRET的EphA4生物传感器可作为强大的工具，用于可视化和研究单个活细胞特定亚细胞区室中的EphA4激活和信号传导。

    关键词： EphA4、膜微区、细胞骨架、FRET生物传感器、活细胞成像

    更新于2025-09-23 15:22:29

  • 2016年欧洲显微镜学大会论文集 || 环节动物生殖细胞囊的组织结构——从电子显微镜到活细胞成像

    摘要： (42)(72)(85)(80)(16)(79)(76)(81)(72)(3)(70)(92)(86)(87)(86)(3)(82)(85)(74)(68)(81)(76)(86)(68)(87)(76)(82)(81)(3)(76)(81)(3)(70)(79)(76)(87)(72)(79)(79)(68)(87)(72)(3)(68)(81)(81)(72)(79)(76)(71)(86)(3)(98)(3)(73)(85)(82)(80)(3)(72)(79)(72)(70)(87)(85)(82)(81)(80)(76)(70)(85)(82)(86)(70)(82)(83)(92)(3)(87)(82)(3)(79)(76)(89)(72)(3)(70)(72)(79)(79)(3)(76)(80)(68)(74)(76)(81)(74)

    关键词： 活细胞成像、显微镜技术、生殖系细胞

    更新于2025-09-23 15:22:29

  • 一种基于选择性二氨基马来腈的双通道发射探针用于Al3+检测及其在活细胞成像中的应用

    摘要： 已合成并表征了一种基于选择性二氨基马来腈的铝离子荧光探针(L)。通过荧光光谱和竞争实验研究了L对不同金属离子的传感行为。结果表明，在乙醇溶液中，L对Al3?表现出双重发射通道(λem 522 & 558 nm)的黄色荧光，且选择性优于其他金属离子。Job图分析证实探针L与Al3?以1:2化学计量比结合，结合常数为9.55×10? M?2，检测限为10.3 nM。荧光开启响应归因于与Al3?结合后光诱导电子转移(PET)和C=N异构化的抑制，而双重发射则源于激发态质子转移(ESIPT)和分子内电荷转移(ICT)过程。此外，该探针成功应用于活体Hela细胞中Al3?的成像。

    关键词： 基于二氨基马来腈的、Al3?、活细胞成像、选择性、双通道

    更新于2025-09-23 15:22:29