[分子生物学方法] 植物长链非编码RNA 第1933卷（方法与实验方案）|| 用于可视化植物中RNA-蛋白质相互作用的三元荧光互补（TriFC）检测法

摘要： RNA-蛋白质相互作用在多种真核生物过程中发挥重要作用。对植物中RNA-蛋白质复合体亚细胞定位的分子成像对于理解这些相互作用至关重要。然而，迄今为止尚未开发出活体植物中RNA-蛋白质相互作用的成像方法。最近，我们通过烟草叶片瞬时表达建立了一个三分子荧光互补（TriFC）系统，用于活体观察RNA-蛋白质相互作用。该方法将传统的双分子荧光互补（BiFC）系统与MS2系统（噬菌体MS2衣壳蛋白[MCP]及其结合RNA序列[MS2序列]）相结合来标记长链非编码RNA。目标RNA被6xMS2标记，MCP和RNA结合蛋白则与YFP片段融合。将这些融合RNA和蛋白的DNA构建体通过农杆菌悬浮液浸润到烟草叶片中，通过共聚焦显微镜观察活体RNA-蛋白质相互作用。