研究目的
开发一种基于化学发光(CL)的平台,利用PtCuCo三金属合金(PtCuCo-TAs)作为纳米酶催化剂,通过其对鲁米诺-H2O2体系的独特催化特性实现miRNA-21的灵敏检测。
研究成果
采用PtCuCo-TAs作为纳米酶催化剂的开发型CL平台,为miRNA-21检测提供了一种灵敏、选择性高且无需酶参与的方法。该检测方法展现出0.167 fM的低检测限,并对其他RNA具有良好的选择性,有望成为早期临床诊断和癌症治疗的有力工具。
研究不足
该研究的局限性在于检测方法对miRNA-21的特异性以及复杂生物基质可能产生的干扰。PtCuCo-TAs的合成与表征需要精确控制反应条件。
1:实验设计与方法选择:
采用一步还原法合成PtCuCo-TAs,系统研究了其催化鲁米诺-H2O2体系的化学发光特性。基于PtCuCo-TAs纳米酶催化作用,结合单腿行走策略构建信号放大平台用于miRNA-21检测。
2:样本选择与数据来源:
以miRNA-21为模型靶标,人血清样本采集自青岛市中心医院用于验证实验。
3:实验仪器与材料清单:
JEM-2100透射电镜、JSM-6500F扫描电镜、ESCALAB 250Xi能谱仪、RFL-1化学发光仪、链霉亲和素包被磁珠(SA-MBs),以及氯铂酸钾、六水合氯化钴(II)、二水合氯化铜(II)、硼氢化钠、抗坏血酸、三(2-羧乙基)膦(TCEP)和鲁米诺等化学试剂。
4:实验流程与操作步骤:
合成并表征PtCuCo-TAs,构建miRNA-21化学发光检测平台,包括H1固定于磁珠、与miRNA-21及H2杂交、捕获pDNA-PtCuCo-TAs复合物,最后加入H2O2和鲁米诺溶液测定化学发光信号。
5:数据分析方法:
测量化学发光强度并与miRNA-21浓度关联,评估检测方法的特异性与灵敏度,计算检测限值。
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JEM-2100 transmission electron microscope
JEM-2100
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Obtaining transmission electron microscopy (TEM) images.
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JSM-6500F machine
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Recording scanning electron microscopy (SEM) images.
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ESCALAB 250Xi spectrometer
ESCALAB 250Xi
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Conducting X-ray photoelectron spectroscopy (XPS) measurements.
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RFL-1 CL instrument
RFL-1
Collecting CL signal equipped with a photomultiplier operated at 350 V.
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Streptavidin-coated magnetic beads
SA-MBs
Tianjin Baseline
Used in the immobilization of H1 for miRNA-21 detection.
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