研究目的
研究原纤维形态对ThT荧光和ThT结合位点的影响，使用两种形态不同但化学性质相同的α-突触核蛋白多形体。
研究成果
研究表明，不同性质的ThT结合位点分布具有多晶型特异性，这会影响观察到的ThT荧光强度。该结果强调了在基于ThT的淀粉样蛋白研究中考虑纤维形态的重要性。
研究不足
该研究聚焦于两种特定的α-突触核蛋白突变体及其多态性，可能无法涵盖所有可能的淀粉样纤维形态。由于存在多个具有不同亲和力的结合位点，硫黄素T荧光数据的解读较为复杂。
1：实验设计与方法选择：
研究在统一聚集条件下对重组产生的α-突触核蛋白（aSyn）突变体（A30P和A53T）进行纤维化实验，采用ThT荧光追踪。通过接种聚集反应制备以A30P或A53T种子为模板、具有相同野生型单体结构的纤维。
2：样本选择与数据来源：
样本取自聚集反应平台期，通过高速离心分离纤维与单体/寡聚体。
3：实验设备与材料清单：
使用原子力显微镜（Bioscope Catalyst仪器）、时间相关单光子计数系统（连接Fluoromax-4荧光光谱仪的FluoroHub）及Safire2酶标仪。
4：实验流程与操作步骤：
通过ThT荧光发射强度监测聚集反应，AFM样本经云母吸附制备，荧光寿命由TCSPC测定。
5：数据分析方法：
采用DAS6软件处理荧光寿命数据，SPIP 6.0.13软件分析AFM图像。
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Bioscope Catalyst
NSC36 probe, tip B
Bruker
Atomic force microscopy imaging
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FluoroHub
HORIBA Jobin Yvon
Time correlated single photon counting
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Fluoromax-4 spectrofluorometer
HORIBA Jobin Yvon
Spectrofluorometry
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Safire2 microplate reader
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Monitoring aggregation reactions
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Pulsed diode light source
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