研究目的
开发一种基于聚羟基脂肪酸酯(PHA)并通过稀土金属离子修饰的高效、生物相容性荧光材料,以解决现有生物医学应用中荧光材料的生物毒性问题。
研究成果
稀土改性的PHA复合材料展现出强烈的光致发光、增强的亲水性和优异的生物相容性,使其成为生物成像和荧光探针等生物医学应用的有前途候选材料。PHA的生物降解性与稀土离子发光特性的结合,为开发功能性材料提供了一种新途径。
研究不足
该研究仅限于采用人骨髓间充质干细胞进行的体外生物相容性测试,未开展体内研究和长期毒性评估。该材料在不同生理条件下的性能表现及工业化生产的可扩展性可能需要进一步优化。
1:实验设计与方法选择:
本研究采用工程化Halomonas bluephagenesis进行功能性聚羟基脂肪酸酯(Functional-PHA)的微生物合成,随后通过硫醇-烯点击反应对PHA进行化学改性以接枝N-乙?;?L-半胱氨酸(NAL),并与稀土离子(Eu3?和Tb3?)配位。理论模型包括金属螯合的配位化学原理及光致发光原理。
2:样本选择与数据来源:
样本包括功能性PHA、接枝NAL的PHA以及稀土配位的PHA。数据来源于细菌发酵与化学合成过程。
3:实验设备与材料清单:
设备包括旋转摇床(Multitron-Pro,INFORS,瑞士)、索氏提取器(Soxtec 2050,Foss,丹麦)、核磁共振仪(JNM-ECA600,JEOL,日本)、凝胶渗透色谱仪(LC-20A配GPC-804C色谱柱,SHIMADZU,日本)、傅里叶变换红外光谱仪(Bruker VERTEX70,Horiba,德国)、紫外-可见分光光度计(UV-3600,SHIMADZU,日本)、荧光分光光度计(FP-6500,Jasco,日本)、荧光光谱仪(FLS980,Edinburgh Instruments,英国)、差示扫描量热仪(DSC-Q20,TA,美国)、热重分析仪(TGA-50,SHIMADZU,日本)、接触角测量系统(OCA15Pro,DataPhysics,德国)、酶标仪(Varioskan Flash,Thermo-Fisher Scientific,美国)及倒置荧光显微镜(OLYMPUS IX83,日本)。材料包括氯仿、四氢呋喃、甲醇、乙醇、NAL、DMPA、DMSO、PLLA、稀土硝酸盐及细胞培养试剂。
4:实验步骤与操作流程:
步骤包括细菌发酵生产PHA、通过提取与沉淀纯化、紫外光下硫醇-烯反应、与稀土离子的配位反应、溶剂浇铸法制备薄膜,以及通过核磁共振、凝胶渗透色谱、傅里叶变换红外光谱、紫外-可见光谱、发光研究、差示扫描量热、热重分析、接触角测量、细胞活力测定及细胞形态观察进行表征。
5:数据分析方法:
数据采用OPUS 7.0软件分析傅里叶变换红外光谱,凝胶渗透色谱使用标准校准法,细胞活力测定采用统计方法分析。
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NMR Instrument
JNM-ECA600
JEOL
Characterization of polymer structures using 1H NMR.
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GPC System
LC-20A
SHIMADAZU
Measurement of molar mass and polydispersity of polymer samples.
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FT-IR Spectrometer
VERTEX70
Bruker
Fourier transform infrared spectroscopy for chemical group analysis.
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UV-Vis Spectrophotometer
UV-3600
SHIMADAZU
Recording UV-Vis absorption spectra of samples.
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Spectrofluorometer
FP-6500
Jasco
Measurement of luminescence emission spectra.
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Fluorescence Spectrometer
FLS980
Edinburgh Instruments
Measurement of absolute fluorescence quantum efficiency.
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TGA Instrument
TGA-50
SHIMADAZU
Thermal gravimetry analysis for thermal stability assessment.
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Microplate Reader
Varioskan Flash
Thermo-Fisher Scientific
Measurement of absorbance in cell viability assays.
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Inverted Fluorescence Microscope
IX83
OLYMPUS
Observation of cell morphology on films.
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Rotary Shaker
Multitron-Pro
INFORS
Used for bacterial cultivation at controlled temperature and shaking speed.
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Soxhlet Extractor
Soxtec 2050
Foss
Used for extraction of intracellular PHAs from lyophilized cells.
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DSC Instrument
DSC-Q20
TA
Differential scanning calorimetry for thermal property analysis.
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Contact Angle System
OCA15Pro
DataPhysics
Measurement of water contact angles on sample films.
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