研究目的
利用小分子探针（γ3-Cy5.5）检测ICAM-1在体内外表达情况，并通过近红外荧光成像诊断三阴性乳腺癌。
研究成果
γ3-Cy5.5探针能有效靶向三阴性乳腺癌中的ICAM-1，为早期诊断提供了一种具有高特异性的非侵入性方法，并具有未来治疗应用的潜力。
研究不足
探针显示在肝脏和肾脏中分布，这对小分子探针来说很常见，可能会影响背景信号。该研究仅限于异种移植模型，可能无法完全代表人类情况。
1：实验设计与方法选择：
研究通过体外和体内实验评估ICAM-1表达及小分子探针靶向性。方法包括蛋白质印迹、流式细胞术、细胞毒性检测、共聚焦显微镜和近红外荧光成像。
2：样本选择与数据来源：
使用人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231和非三阴性乳腺癌细胞系MCF-7（购自ATCC）。动物模型为荷瘤的裸小鼠。
3：实验设备与材料清单：
设备包括蛋白质印迹装置、流式细胞仪（BD FACSCalibur）、共聚焦显微镜、微孔板分光光度计和活体成像系统（Maestro）。材料包括细胞培养基、抗体、肽段（γ3-Cy5.5和γ3S-Cy5.5）及染料。
4：5和γ3S-Cy5）及染料。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：培养细胞并分析ICAM-1表达；合成探针并检测其体外细胞毒性与结合能力；体内实验中向小鼠注射探针并在不同时间点成像。
5：数据分析方法：
采用非配对t检验进行统计分析，使用ImageJ等软件进行定量分析。
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DMEM
High-glucose
GIBCO
Cell culture medium.
-
BD FACSCalibur flow cytometer
FACSCalibur
BD Biosciences
Used for flow cytometric analysis to detect ICAM-1 expression and binding properties of probes.
-
Maestro in vivo imaging system
Maestro
CRi
Used for near-infrared fluorescence imaging in vivo and ex vivo.
-
microplate spectrophotometer
Thermo Fisher Scientific
Used for cytotoxicity assays to measure optical density.
-
laser scanning confocal microscope
Used for immunofluorescence staining and imaging of cells.
-
FBS
GIBCO
Supplement for cell culture.
-
Pen/Strep
GIBCO
Antibiotic for cell culture.
-
RIPA buffer
Used for cell lysis in Western blotting.
-
polyvinylidene difluoride membranes
Immobilon P
Millipore
Used for protein transfer in Western blotting.
-
primary antibody G5
sc-8439
Santa Cruz
Used for detecting ICAM-1 in Western blotting.
-
secondary antibody
horseradish peroxidase-conjugated anti-mouse-IgG
GE Healthcare
Used in Western blotting for detection.
-
phycoerythrin/anti-ICAM-1 antibody
Biolgend
Used for flow cytometric analysis of ICAM-1 expression.
-
CCK8 solution
Sigma-Aldrich
Used for cytotoxicity assays.
-
96-well plates
Corning Incorporated
Used for cell culture and assays.
-
DAPI
Used for staining cell nuclei in immunofluorescence.
-
γ3-Cy5.5 probe
Shanghai Sangon Biological Engineering Technology & Services Co. Ltd.
Small-molecule probe for targeting ICAM-1 in NIRF imaging.
-
γ3S-Cy5.5 probe
Shanghai Sangon Biological Engineering Technology & Services Co. Ltd.
Control probe for comparison in experiments.
-
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