研究目的
开发一个大规模脂质分析平台，用于定位不饱和脂质中的碳-碳双键（C=C）以区分C=C位置异构体——这在传统脂质组学中具有挑战性，并将该技术应用于乳腺癌和2型糖尿病等疾病的生物标志物发现。
研究成果
LC-PB-MS/MS平台可在C=C位置水平上对不饱和磷脂进行全面结构分析，在牛肝中鉴定出200多种脂质和55个异构体组。该平台在测量异构体比例方面显示出高精度，且降低了个体间差异，适用于乳腺癌和2型糖尿病的生物标志物发现——在这类疾病中，异构体组成变化比亚类水平分析能提供更可靠的指标。
研究不足
该研究的局限性在于离子阱仪器的质量分辨能力，可能无法可靠识别与二?；使泊媲易魑我煞值拿阎Ｓ捎诓槐ズ椭首狿B产物时存在损失，LC-PB-MS/MS的灵敏度低于LC-MS/MS。该方法需要预先测定脂肪酸?；槌梢匀范–=C位置，且部分低信噪比或存在重叠的次要异构体可能未被检出。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用在线联用的液相色谱-帕特诺-布奇（PB）反应-串联质谱（LC-PB-MS/MS）平台，通过PB反应实现碳碳双键特异性衍生化，并选用亲水相互作用色谱（HILIC）进行脂质类别分离。
2：样本选择与数据来源：
样本包括牛肝极性脂质提取物、人乳腺癌组织样本（6例癌组织及6例癌旁组织）以及2型糖尿病患者与对照组的血浆样本（各6例）。脂质提取采用改良Folch法。
3：实验仪器与材料清单：
关键设备包括ExionLC AC系统（Sciex）、4500 QTRAP质谱仪（Sciex）、由FEP管和低压汞灯自制的流动微反应器，以及HILIC色谱柱（150 mm×2.1 mm，硅胶颗粒，2.7 μm，Sigma-Aldrich）。试剂包含丙酮、乙腈、乙酸铵及Avanti Polar Lipids公司提供的脂质标准品。
4：1 mm，硅胶颗粒，7 μm，Sigma-Aldrich）。试剂包含丙酮、乙腈、乙酸铵及Avanti Polar Lipids公司提供的脂质标准品。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：工作流程首先通过LC-MS/MS鉴定脂质亚类及脂肪酸链水平，继而采用数据依赖性LC-PB-MS/MS确定碳碳双键位置。PB反应在液相色谱分离后通过流动微反应器中的紫外照射完成。数据采集模式包括前体离子扫描（PIS）、中性丢失扫描（NLS）及增强子离子扫描（EPI）。
5：数据分析方法：
使用Analyst软件及自主开发的Lipid Omega Analyzer（LOA）程序进行数据分析，实现亚类、?；醇疤继妓恢玫慕峁辜?。统计分析包括t检验和层次聚类分析。
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HILIC column
150 mm × 2.1 mm, silica spheres, 2.7 μm
Sigma-Aldrich
Hydrophilic interaction chromatography column for lipid separation
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ExionLC AC system
ExionLC AC
Sciex
Liquid chromatography system for separating lipid classes
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4500 QTRAP mass spectrometer
4500 QTRAP
Sciex
Tandem mass spectrometer for lipid analysis using various scan modes
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FEP tubing
0.03-in. i.d., 1/16-in. o.d.
Zeus Inc.
Material for the flow microreactor used in the Paternò-Büchi reaction
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Low-pressure mercury lamp
80-1057-01
BHK Inc.
UV light source for inducing the Paternò-Büchi reaction
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Handheld homogenizer
Jingxin Technology
Used for homogenizing tissue samples during lipid extraction
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Centrifuge
Eppendorf
Used for separating phases during lipid extraction
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