研究目的
研究紫外线照射下人结膜上皮细胞中凋亡诱导的增殖现象，重点关注凋亡、活性氧生成、JNK磷酸化、IL-11水平、AP-1产生以及c-myc、c-fos和c-jun表达的变化。
研究成果
紫外线照射通过活性氧生成和JNK激活诱导HCE细胞凋亡，进而增加IL-11产生、AP-1激活及增殖标志物（c-myc、c-fos、c-jun）表达。这提示了一种凋亡诱导的代偿性增殖机制，有助于维持紫外线暴露结膜上皮细胞的组织稳态，对理解翼状胬肉发病机制具有启示意义。
研究不足
该研究仅限于体外细胞培养模型，可能无法完全复现体内条件。虽然未明确说明样本量或潜在偏差等具体局限性，但使用单一细胞系和特定紫外线条件可能会限制结果的普适性。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用紫外线照射诱导HCE细胞凋亡，通过检测多种生物标志物评估代偿性增殖机制。方法包括凋亡检测、活性氧测定、ELISA蛋白水平分析及免疫细胞化学染色。
2：样本选择与数据来源：
购买并培养HCE细胞（Clone-1-5c-4）。细胞接受特定剂量（30、99或296 mJ/cm2）紫外线照射后，在不同时间点进行分析。
3：99或296 mJ/cm2）紫外线照射后，在不同时间点进行分析。 实验设备与材料清单：
3. 实验设备与材料清单：紫外线灯（TFX-20MC，Vilber Lourmat）、Muse Annexin V和死细胞检测试剂盒（EMD Millipore）、CM-H2DCFDA（Invitrogen）、ELISA试剂盒（如Ray Bio的基于细胞的JNK磷酸化ELISA试剂盒、Abcam的人IL-11 ELISA试剂盒）、免疫细胞化学染色试剂（如Santa Cruz Biotechnology、Oncogene Research Products、Cell Signaling Technology的抗体）。
4：实验流程与操作步骤：
细胞培养后进行紫外线照射，随后使用指定试剂盒和方法检测凋亡、活性氧生成、JNK磷酸化、IL-11水平、AP-1活性以及c-myc、c-fos、c-jun表达。采用Student t检验或ANOVA进行统计分析。
5：数据分析方法：
使用统计检验（两组比较用Student t检验，重复测量用ANOVA）分析数据，显著性水平为P < 0.05，结果以均值±标准误表示。
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UV lamp
TFX-20MC
Vilber Lourmat
Used for UV irradiation of HCE cells to induce apoptosis.
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Muse Annexin V and Dead Cell Assay Kit
EMD Millipore
Used to measure apoptosis in HCE cells by detecting Annexin V binding and dead cells.
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CM-H2DCFDA
5-(and 6-) chloromethyl-2?7?-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester
Invitrogen
Used to measure ROS generation in HCE cells by fluorescence detection.
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Cell-Based JNK (Thr183/Tyr185) Phosphorylation ELISA kit
Ray Bio (Ray Biotech)
Used to measure JNK phosphorylation in cell lysates using ELISA.
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IL-11 Human ELISA Kit
Abcam
Used to measure IL-11 levels in culture supernatant using sandwich ELISA.
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Transcription Factor ELISA Kit
Panomics (Affymetrix)
Used to measure AP-1 activity in nuclear extracts using ELISA.
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Nuclear/Cytosol Fraction Kit
BioVision
Used to extract cytoplasm and nucleus from cells for fractionation.
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SP600125
Sigma-Aldrich
Used as a JNK inhibitor in pretreatment of cells.
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Recombinant human IL-11
PeproTech
Used to treat cells to study the effect of IL-11 on gene expression.
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c-myc antibody
c-8 mouse monoclonal IgG2a (sc-41)
Santa Cruz Biotechnology
Used as primary antibody in immunocytochemical staining for c-myc expression.
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c-fos antibody
Ab-2 rabbit polyclonal IgG (PC05-100UG)
Oncogene Research Products
Used as primary antibody in immunocytochemical staining for c-fos expression.
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Phospho-c-jun antibody
Ser63 rabbit monoclonal IgG (54B3)
Cell Signaling Technology
Used as primary antibody in immunocytochemical staining for c-jun expression.
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Twinkle LB 970 fluorometer
Berthold Technologies
Used to measure fluorescence intensity for ROS detection.
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Microplate reader
Used to measure absorbance at 450 nm in ELISA assays.
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EnVision staining system
Used for immunocytochemical staining with peroxidase-conjugated dextran polymer reagent.
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Chamber Slides
Chamber SlidesTM
Used for culturing cells for immunocytochemical staining.
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Medium 199
Sigma-Aldrich
Culture medium for HCE cells, containing glutamine, fetal bovine serum, and penicillin-streptomycin.
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HCE cells
Clone-1-5c-4 (Wong-Kilbourne derivative of Chang conjunctiva clone)
DS Pharma Biomedical
Human conjunctival epithelial cell line used as the experimental model.
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