1：实验设计与方法选择：

本研究将铽供体与Cy5.5染料受体的时间门控福斯特共振能量转移（TG-FRET）技术整合至杂交链式反应（HCR）中用于核酸检测。设计针对miR-20a和miR-21的特异性序列发夹探针，分别标记Tb或Cy5.5，通过HCR扩增实现FRET。

2：5染料受体的时间门控福斯特共振能量转移（TG-FRET）技术整合至杂交链式反应（HCR）中用于核酸检测。设计针对miR-20a和miR-21的特异性序列发夹探针，分别标记Tb或Cy5，通过HCR扩增实现FRET。 样本选择与数据来源：

2. 样本选择与数据来源：使用合成微小RNA（miR-20a、miR-21、miR-20b）及其DNA类似物作为靶标（购自Eurogentec），同时测试含血清样本。

3：0a、miR-miR-20b）及其DNA类似物作为靶标（购自Eurogentec），同时测试含血清样本。 实验设备与材料清单：

3. 实验设备与材料清单：设备包括临床免疫荧光酶标仪（KRYPTOR compact plus，赛默飞世尔）、荧光寿命酶标仪（爱丁堡仪器）、脉冲氮激光器（MNL 100，LTB柏林激光技术）、紫外/可见分光光度计（Lambda 35，珀金埃尔默）、荧光计（Xenius，SAFAS）、电泳系统（Mini-PROTEAN Tetra，伯乐）及Zeba脱盐柱（赛默飞世尔）。材料包含Lumi4-Tb-NHS（Lumiphore公司）、Cyanine5.5 NHS酯（Lumiprobe）、寡核苷酸（Eurogentec）、Tris(羟甲基)氨基甲烷、牛血清白蛋白、HEPES（西格玛奥德里奇）、NaCl（杜赫法）及SYBR Green II（赛默飞世尔）。

4：5 NHS酯（Lumiprobe）、寡核苷酸（Eurogentec）、Tris(羟甲基)氨基甲烷、牛血清白蛋白、HEPES（西格玛奥德里奇）、NaCl（杜赫法）及SYBR Green II（赛默飞世尔）。 实验流程与操作步骤：

4. 实验流程与操作步骤：发夹探针经95°C加热后冷却退火。靶标与Tb标记探针孵育后，加入Cy5.5标记探针启动HCR。孵育完成后将样本转移至微孔板，通过配备特定光学滤光片的酶标仪进行TG-FRET检测。通过凝胶电泳验证HCR产物形成。

5：5标记探针启动HCR。孵育完成后将样本转移至微孔板，通过配备特定光学滤光片的酶标仪进行TG-FRET检测。通过凝胶电泳验证HCR产物形成。 数据分析方法：

5. 数据分析方法：基于时间门控光致发光强度计算FRET比值，采用校准曲线定量，并通过福斯特理论公式分析光致发光衰减时间以确定FRET效率及距离。