研究目的
开发一种顺序且可逆的荧光五肽探针,用于在水溶液和活细胞中高选择性和灵敏地检测Cu(II)离子和硫化氢。
研究成果
DP5是一种高选择性、高灵敏度且可逆的荧光探针,可在水溶液和活细胞中顺序检测Cu2+和H2S,具有低检测限和良好的生物相容性,适用于实时监测和生物应用。
研究不足
探针可能受到Hg2+离子的轻微干扰。本研究仅限于特定细胞系(HK2和EJ细胞),可能无法推广至所有生物系统。优化方案可包括在更复杂的生物环境中进行测试。
1:实验设计与方法选择:
探针DP5基于五肽与丹磺?;查钗铮捎霉滔嚯暮铣桑⊿PPS)技术设计。通过荧光光谱分别利用"关闭"和"开启"响应检测Cu2+和H2S。采用理论计算(Gaussian 09在B3LYP/6-31G(d)水平)优化分子结构。
2:样品选择与数据来源:
使用金属离子(硝酸盐和高氯酸盐)、阴离子(钠盐或钾盐)及H2S(来自NaHS)。活细胞(HK2和EJ细胞)培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中。
3:实验仪器与材料清单:
仪器包括Bruker Daltonics Esquire 6000质谱仪、JNM-ECS-400 MHz核磁共振仪、pHS-3E数字pH计、Varian UV-Cary100分光光度计、Cary eclipse荧光分光光度计、LSM 710倒置荧光显微镜及配备Vydac C18柱的HPLC。材料包括Fmoc-Rink Amide树脂、Fmoc L-氨基酸、丹磺酰氯、Sigma Aldrich溶剂及HEPES缓冲液。
4:实验步骤与操作流程:
通过SPPS合成DP5,HPLC纯化,ESI-MS和1H NMR表征。在HEPES缓冲液(pH 7.4)中以330 nm激发进行荧光测量。开展Cu2+和H2S滴定研究、Job图分析及含孵育步骤的细胞成像。
5:4)中以330 nm激发进行荧光测量??笴u2+和H2S滴定研究、Job图分析及含孵育步骤的细胞成像。 数据分析方法:
5. 数据分析方法:荧光强度分析、结合常数计算、检测限测定(3σ/k)及共聚焦显微镜成像。
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spectrometer
Esquire 6000
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spectrophotometer
UV-Cary100
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HPLC column
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Purification of DP5
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Fmoc-Rink Amide resin
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Solid phase peptide synthesis
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Fmoc L-amino acids
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Synthesis of pentapeptide
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dansyl chloride
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Fluorescence group conjugation
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