研究目的
开发一种新型近红外荧光探针，用于在小鼠炎症模型中实现超快、选择性检测具有大斯托克斯位移的过氧亚硝基阴离子。
研究成果
该研究成功开发了一种近红外荧光探针（DCM-OH），可灵敏、选择性地超快速检测过氧亚硝基阴离子。该探针具有低细胞毒性、因大斯托克斯位移实现深层组织穿透的特性，并能在活细胞和炎症小鼠模型中有效成像，为研究生理及病理条件下ONOO?提供了有前景的工具。
研究不足
探针的性能可能受到特定生物环境的影响，其应用主要在小鼠炎症模型中得到验证；需要在其他疾病模型或人体组织中进行进一步验证。DCM-OH的合成产率为40%，该产率可进行优化以提高可扩展性。
1：实验设计与方法选择：
基于二氰亚甲基-4H-吡喃（DCM染料）设计了用于检测ONOO?的探针DCM-OH。合成过程涉及多步有机反应，通过ESI-MS、NMR和HPLC分析验证了检测机制。采用荧光和紫外-可见光谱表征探针对ONOO?的响应。通过细胞成像和活体成像评估其生物应用。
2：样本选择与数据来源：
化学试剂购自商业供应商。HepG2和RAW264.7细胞在DMEM培养基中培养。使用昆明小鼠进行活体研究。以SIN-1作为供体生成ONOO?，并采用其他ROS/RNS分析物进行选择性测试。
3：7细胞在DMEM培养基中培养。使用昆明小鼠进行活体研究。以SIN-1作为供体生成ONOO?，并采用其他ROS/RNS分析物进行选择性测试。 实验设备与材料清单：
3. 实验设备与材料清单：设备包括布鲁克AV-400核磁共振仪、安捷伦Q-TOF质谱仪、岛津UV-3600分光光度计、日立F-7000荧光分光光度计、徕卡SP8共聚焦激光扫描显微镜和珀金埃尔默IVIS活体成像系统。材料包括色谱用硅胶、合成用各类化学品、DMEM培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素、LPS、IFN-γ、SIN-1、AG、TEMPO及MTT检测试剂。
4：AG、TEMPO及MTT检测试剂。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：DCM-OH合成从化合物1开始经多步反应至终产物，通过柱层析纯化。光谱测量在PBS缓冲液中进行。细胞成像包括探针与刺激物/抑制剂预处理后进行共聚焦显微镜观察?；钐宄上癜ㄐ∈驦PS诱导炎症模型，随后注射探针并用IVIS成像。
5：数据分析方法：
通过荧光强度数据计算检测限（3σ/k）。统计分析包括浓度-响应曲线的线性回归。采用MTT法评估细胞活力。对成像数据进行荧光强度对比处理。
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