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oe1(光电查) - 科学论文

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  • [分子生物学方法] 植物长链非编码RNA 第1933卷（方法与实验方案）|| 用于可视化植物中RNA-蛋白质相互作用的三元荧光互补（TriFC）检测法

    摘要： RNA-蛋白质相互作用在多种真核生物过程中发挥重要作用。对植物中RNA-蛋白质复合体亚细胞定位的分子成像对于理解这些相互作用至关重要。然而，迄今为止尚未开发出活体植物中RNA-蛋白质相互作用的成像方法。最近，我们通过烟草叶片瞬时表达建立了一个三分子荧光互补（TriFC）系统，用于活体观察RNA-蛋白质相互作用。该方法将传统的双分子荧光互补（BiFC）系统与MS2系统（噬菌体MS2衣壳蛋白[MCP]及其结合RNA序列[MS2序列]）相结合来标记长链非编码RNA。目标RNA被6xMS2标记，MCP和RNA结合蛋白则与YFP片段融合。将这些融合RNA和蛋白的DNA构建体通过农杆菌悬浮液浸润到烟草叶片中，通过共聚焦显微镜观察活体RNA-蛋白质相互作用。

    关键词： RNA-蛋白质相互作用，长链非编码RNA，TriFC，烟草瞬时表达，在体可视化

    更新于2025-11-21 11:08:12

  • RNA-蛋白质紫外交联实验

    摘要： RNA-蛋白质相互作用在RNA代谢的各个方面都起着至关重要的作用，也在转录后基因调控中扮演主要角色。RNA结合蛋白与病毒基因表达（Ray和Das，2002）及microRNA介导的基因调控（Poria等，2016）有关。本文描述了一种方案：(1)通过紫外线交联共价连接瞬时相互作用的RNA-蛋白质复合物；(2)通过RNase消化去除未受?；さ腞NA；(3)通过SDS-PAGE分析检测RNA-蛋白质复合物。该方案提供了一种快速可靠的方法，可直接测定纯化蛋白的RNA-蛋白质相互作用及其动力学，并有助于发现新的RNA-蛋白质相互作用。

    关键词： 紫外光交联、RNA-蛋白质相互作用、RNA结合蛋白

    更新于2025-09-04 15:30:14