研究目的
通过紫外光交联共价连接瞬时相互作用的RNA-蛋白质复合物，利用RNase消化去除未受保护的RNA，并通过SDS-PAGE分析检测RNA-蛋白质复合物。
研究成果
所述方案为直接检测RNA-蛋白质相互作用及其动力学提供了一种快速可靠的方法，有助于发现新型RNA-蛋白质相互作用。
研究不足
该协议需要特定设备，如紫外线交联仪和磷光成像仪，且使用放射性标记材料需遵循适当的生物安全规范。
1：实验设计与方法选择：
该方案包括通过紫外线交联共价连接RNA-蛋白质复合物，用RNase消化去除未受?；さ腞NA，以及通过SDS-PAGE分析检测复合物。
2：样本选择与数据来源：
使用纯化蛋白和细胞裂解物进行RNA-蛋白质结合实验。
3：实验设备与材料清单：
包括微量离心管、96孔板、转录试剂盒、放射性标记UTP、RNase抑制剂和紫外线交联仪等。
4：实验步骤与操作流程：
详细步骤包括模板制备、RNA制备、RNA-蛋白质结合、紫外线交联及RNA-蛋白质复合物分离。
5：数据分析方法：
通过磷成像和X光片显影可视化RNA-蛋白质复合物。
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microcentrifuge tube
MCT-150-C
Corning, Axygen?
Used for holding samples during experiments
-
Transcription Kit
MAXIscript? Kit
Thermo Fisher Scientific, Invitrogen?
Used for in vitro transcription
-
α-P32 UTP
BLU007H250UC
PerkinElmer
Used as a radiolabel in RNA preparation
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96-well round-bottomed plate
650101
Greiner Bio one International
Used for holding reaction mixtures during UV crosslinking
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UV cross-linker
CL1000
UVP
Used for UV crosslinking RNA-protein complexes
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Vertical gel electrophoretic system
Mini-PROTEAN Tetra Cell
Bio-Rad Laboratories
Used for SDS-PAGE analysis
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Phosphorimager
Typhoon Trio
GE Healthcare
Used for visualizing RNA-protein complexes
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