1：实验设计与方法选择：

本研究通过荧光素醛与硝基苯胺衍生物（2,4-二硝基苯胺和2,4-二硝基苯肼）在乙醇和冰醋酸中反应合成两种席夫碱荧光素探针（FDA和FDH），随后进行纯化。利用荧光和吸收光谱研究氨基和肼基取代基的光学性质影响，采用FT-IR、NMR、质谱和DFT计算探究作用机制。

2：样品选择与数据来源：

探针由市售化学品合成。选择性测试使用金属离子（Ce4+、Ce3+、Al3+、La3+、Fe3+、Hg2+、Cu2+、Co2+、Ni2+、Mn2+、Pb2+、Zn2+、Ca2+）和阴离子（OCl?、H2PO4?、HPO42?、F?、Cl?、Br?、I?、S2?、S2O82?、S2O32?、SO32?、SO42?、CH3COO?、NO3?、NO2?、H2O2）。分析中国天津的自来水、团泊湖水和游泳池水等实际水样，培养血管平滑肌细胞（VSMCs）用于生物成像。

3：4+、Ce3+、Al3+、La3+、Fe3+、Hg2+、Cu2+、Co2+、Ni2+、Mn2+、Pb2+、Zn2+、Ca2+）和阴离子（OCl?、H2PO4?、HPO42?、F?、Cl?、Br?、I?、S2?、S2O82?、S2O32?、SO32?、SO42?、CH3COO?、NO3?、NO2?、H2O2）。分析中国天津的自来水、团泊湖水和游泳池水等实际水样，培养血管平滑肌细胞（VSMCs）用于生物成像。 实验设备与材料清单：

3. 实验设备与材料清单：材料包括阿拉丁试剂公司的荧光素（90%）、2,4-二硝基苯胺（95%）、2,4-二硝基苯肼（95%）；国药集团化学试剂公司的金属盐和阴离子盐；天津膜天膜的PVDF膜；双蒸水。仪器：天津港东TENSOR37傅里叶变换红外光谱仪；日本UV-vis分光光度计（TU-1901）；天津港东F-380荧光分光光度计；布鲁克Advance IIWB 400 MHz核磁共振波谱仪；布鲁克micro TOF-QII质谱仪；梅特勒托利多pH计；FLS980荧光寿命光谱仪；奥林巴斯蔡司710倒置荧光显微镜。

4：实验步骤与操作流程：

合成过程包括在乙醇和醋酸中回流反应物48小时，真空蒸馏和柱层析纯化。光谱测量前配制0.25 mM探针储备液（5%乙醇）和2×10-3 M分析物溶液，测试液用PBS缓冲液（pH 7.4）稀释。室温下记录特定激发/发射条件下的紫外-可见和荧光光谱，测试pH影响范围。实际样品分析通过向水样中添加分析物，PVDF膜浸泡探针溶液干燥后用于现场检测，细胞培养将VSMCs与探针和分析物共孵育后成像。

5：25 mM探针储备液（5%乙醇）和2×10-3 M分析物溶液，测试液用PBS缓冲液（pH 4）稀释。室温下记录特定激发/发射条件下的紫外-可见和荧光光谱，测试pH影响范围。实际样品分析通过向水样中添加分析物，PVDF膜浸泡探针溶液干燥后用于现场检测，细胞培养将VSMCs与探针和分析物共孵育后成像。 数据分析方法：

5. 数据分析方法：通过线性回归量化荧光强度变化测定检测限，采用Job图和Benesi-Hildebrand方程确定配合物比例，使用Material Studio套件DMol3方法进行DFT计算。实际样品统计分析包括回收率和相对标准偏差计算。