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细胞因子激活和氧化应激对人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞功能的影响
摘要： 目的：在年龄相关性黄斑变性（AMD）等多种视网膜并发症中，氧化应激水平升高且细胞因子浓度增加。这些因素已被证实会改变原代及永生化视网膜色素上皮（RPE）细胞中基质金属蛋白酶（MMP）的激活与表达。然而，其对人胚胎干细胞（hESC）来源的RPE细胞的影响尚不明确。 方法：将成熟hESC-RPE细胞分别暴露于炎症细胞因子（IFN-γ或TNF-α）24小时或氧化应激（H2O2）1小时。通过跨上皮电阻（TEER）分析屏障功能变化；采用实时定量逆转录聚合酶链反应检测MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、I型胶原和IV型胶原基因表达；利用蛋白质印迹法或ELISA分别检测MMP-1和MMP-3蛋白表达；并通过明胶酶谱法分析MMP-2和MMP-9蛋白的激活与分泌情况。 结果：正常状态下，成熟hESC-RPE细胞低水平表达MMP-1、-2、-3和-9基因。肿瘤坏死因子-α可上调MMP-1和-2基因表达，而H2O2则上调MMP-3和-9基因表达。明胶酶谱显示IFN-γ和TNF-α诱导MMP-2及高分子量MMP（HMW MMP）分泌，但H2O2会抑制其分泌。此外，TNF-α和H2O2显著降低屏障功能。 结论：本研究表明细胞因子可诱导MMP-1和-2的基因及蛋白表达，而H2O2仅诱导MMP-3和-9基因表达但不促进其蛋白分泌。这些数据提示，在氧化应激和细胞因子刺激下，成熟hESC-RPE细胞在MMP分泌与表达方面与其在人眼中的天然对应物相似，可用于体外模拟涉及MMP活性改变的视网膜疾?。ㄈ鏏MD、糖尿病视网膜病变或增生性玻璃体视网膜病变）。
关键词： 基质金属蛋白酶、MMP、干细胞、视网膜色素上皮
更新于2025-11-21 11:08:12
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在视网膜退化小鼠模型中玻璃体内注射人骨髓CD34+干细胞
摘要： 目的：玻璃体内注射小鼠谱系阴性骨髓（BM）造血细胞可延缓视网膜退化。由于人骨髓CD34?造血细胞与小鼠细胞不完全可比，本研究采用小鼠模型探究玻璃体内注射人骨髓CD34?细胞对退化视网膜的影响。 方法：系统性使用他克莫司和雷帕霉素免疫抑制的C3H/HeJrd1/rd1小鼠，玻璃体内注射磷酸盐缓冲液（PBS，n=16）或经磁珠分选并标记增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的人骨髓CD34?细胞（n=16）。注射后1周和4周，通过扫描激光检眼镜（SLO）/光学相干断层扫描（OCT）成像及视网膜电图（ERG）检测。处死后取眼球进行视网膜免疫组化和微阵列分析。 结果：活体SLO眼底成像显示玻璃体内注射后EGFP标记细胞定位于眼内。同步OCT分析发现EGFP标记细胞位于视网膜表面，形成锯齿状结构。视网膜免疫组化证实EGFP标记细胞存在于视网膜表面及神经节细胞邻近区域。所有眼球的ERG检测显示注射后1周和4周均呈平坦信号。细胞注射后的视网膜微阵列分析显示超过300个鼠源基因表达改变，主要涉及光感受器功能维持、凋亡调控相关基因。 结论：人骨髓CD34?细胞能快速归巢至退化视网膜表面。尽管在此快速进展性视网膜退化模型中ERG未显示功能获益，但CD34?细胞治疗相关的视网膜分子变化提示其潜在营养再生效应，值得进一步研究。
关键词： 玻璃体内，干细胞，CD34阳性，视网膜变性
更新于2025-09-23 15:22:29
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通过拉曼显微镜评估成骨细胞培养物的骨质量
摘要： 自体干细胞/祖细胞的应用为修复颅面骨缺损提供了一种有前景的方法。颅盖骨被认为是干细胞/祖细胞的可行来源，这些细胞可在体外移植形成骨组织。然而，目前尚不清楚细胞培养中形成的骨与天然骨的质量是否相似。本研究比较了成骨细胞培养物中形成的骨矿物质质量与出生后小鼠颅盖骨的差异。鉴于细胞光谱与胶原光谱存在相似性，研究还探讨了提取细胞活性和骨基质质量信息的可行性。从胎鼠颅盖骨分离的干细胞/祖细胞在成骨分化条件下于熔融石英载玻片上培养28天。在特定时间点取出载玻片，通过拉曼显微镜和矿物染色技术进行分析。结果显示，培养第28天形成的骨与1日龄出生后小鼠颅盖骨相似，具有相当的矿化程度、矿物结晶度和胶原交联比率。但与1日龄出生后骨相比，第28天形成的骨中有序胶原纤维的程度较低。总体而言，成骨细胞培养中形成的骨表现出渐进的基质成熟和矿化过程，但未能完全复现天然骨中高度有序的胶原纤维结构。
关键词： 拉曼显微镜、成骨分化、组织工程、干细胞、骨质量
更新于2025-09-23 15:21:01
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在三维水凝胶微珠中单克隆胚胎干细胞的长期灌注培养，用于分化的连续光学分析
摘要： 发育细胞生物学需要能够在长时间内追踪单个细胞命运的技术，以监测和理解自我更新、分化和重编程等过程。本研究提出一种工作流程：将单细胞封装入液滴（直径80微米，体积约270皮升），随后将该液滴隔室转化为水凝胶微珠。通过电聚结实现芯片上脱乳化后，这些三维支架被阵列化于芯片上进行长期灌注培养，从而支持超过68小时的连续细胞成像。在此平台上，我们研究了小鼠胚胎干细胞对不同生长培养基（2i和N2B27）的响应，证明可通过荧光延时显微镜、免疫染色以及逆转录定量PCR（RT-qPCR）来监测多能性退出过程。这种明确的3D环境模拟了细胞自然生长环境（如组织内），并能在多种基质中研究细胞发育。大规模细胞培养（并行2000个微珠）可能揭示低通量或群体研究中未被检测到的罕见事件。该平台有助于从定性和定量层面深入理解外部因素对细胞行为的作用机制。
关键词： 微滴，水凝胶，单细胞分析，干细胞，多能性
更新于2025-09-23 15:19:57
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利用微拉曼光谱探测原代间充质干细胞分化状态
摘要： 我们采用微拉曼光谱技术深入探究了从牙周韧带中分离出的单个间充质干细胞的固有生物分子特征。此外，这些细胞被诱导分化为成脂、成软骨和成骨谱系，并通过微拉曼光谱评估其分化状态。两种情况下均使用玻璃盖玻片作为基底材料，因其具有广泛可得性和成本效益优势。所有样本组均观察到相同行为模式——表现为拉曼光谱的变化：蛋白质/脂质谱带相对强度增加而核酸谱带减弱。通过主成分分析形式的综合统计检验，揭示出具有相似特征的细胞明显聚类现象。尽管原代干细胞及其分化谱系存在异质性，我们证实微拉曼光谱足以区分细胞状态，这对医学临床应用具有重要价值。
关键词： 分化、干细胞、拉曼光谱
更新于2025-09-24 05:18:31
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893 低强度激光疗法治疗男女型脱发：文献综述
摘要： TRPV3功能获得性突变可导致奥姆斯特德综合征，其特征为掌跖及口周角化病、瘙痒和脱发。这些表型的潜在机制尚不明确。本研究通过引入与奥姆斯特德综合征患者（G568V位点）相同的点突变，首次构建了Trpv3基因敲入小鼠模型。纯合子Trpv3敲入鼠（Trpv3G568V/G568V）出生两周后即出现毛发稀疏。组织学显示突变小鼠毛干在漏斗部扭曲无法穿透皮肤。免疫荧光表明突变毛囊中毛发角蛋白和KRT71表达减少，内根鞘细胞分化受损——这与原位杂交及我们构建的Trpv3报告基因小鼠所示Trpv3主要表达于内根鞘近端区域的模式一致。该脱发表型呈进行性发展且缺乏典型休止期，经过三个毛发生长周期后Trpv3G568V/G568V小鼠完全秃毛。其退化毛囊呈现表皮标志物（包括KRT1和兜甲蛋白）异常增殖与异位表达的特征，伴随CD34、NFATc1和KRT15标记的毛囊干细胞逐渐丧失及典型毛囊结构破坏。本研究表明Trpv3是内根鞘角质形成细胞分化的重要调控因子，而TRPV3功能获得性突变相关脱发源于增殖分化程序异常，最终导致毛囊角质形成细胞干细胞耗竭及毛囊永久性结构破坏。
关键词： 角质形成细胞分化、TRPV3、Olmsted综合征、干细胞、脱发
更新于2025-09-16 10:30:52
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冷冻对金纳米颗粒标记的间充质干细胞的影响
摘要： 干细胞疗法为许多预后不良疾病的患者带来了希望，但目前临床转化受限于缺乏能在治疗全程追踪干细胞的体内监测技术。超声引导的纳米颗粒标记干细胞光声成像可能成为解决方案。为实现光声追踪，必须采用光学吸收对比剂标记干细胞。金纳米颗粒因其良好的细胞相容性和近红外强吸收特性成为候选材料，但现有标记方案需将干细胞与纳米颗粒在培养基中孵育长达24小时方可使用。虽然干细胞监测需求迫切，但额外制备时间可能难以实现——既增加成本，又无法满足急诊及择期手术的即时治疗需求。为此，我们尝试在干细胞冷冻长期保存前完成标记。已知干细胞经冻存解冻后仍能保持细胞功能，但金纳米颗粒对此过程的影响尚未明确。本研究评估了金纳米球标记间充质干细胞在冷冻保存1周、1个月及2个月后的存活率、多向分化潜能和光声活性，并与同期冷冻保存的未标记干细胞对照比较。MTT检测显示存活率无显著变化，脂肪分化与成骨分化的功能表现也与对照组相当，同时保持了强烈的光声信号及相似的光谱特征。虽然需要更多干细胞类型和纳米颗粒的验证研究，但本数据表明纳米颗粒标记干细胞的生物学功能与成像特性在冻存后依然保持，这将通过简化临床流程整合来推动干细胞监测技术的临床转化。
关键词： 光声成像、细胞追踪、冷冻、金纳米球、超声、干细胞
更新于2025-09-16 10:30:52
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PS02.062：共聚焦激光显微内镜在评估内镜治疗后持续性/复发性肠上皮化生/肿瘤中的应用
摘要： 近期研究发现，膜蛋白（如离子转运体）在癌症干细胞（CSCs）中特异性激活。因此，这些分子作为恶性肿瘤的新型化疗靶点正受到广泛关注。本研究旨在探究食管鳞状细胞癌（ESCC）中癌症干细胞的离子转运相关分子表达及活性情况。
关键词： 食管鳞状细胞癌、FDG-PET/CT、食管癌、食管癌、干细胞、TRPV2、曲尼司特、假阳性、长链非编码RNA（LncRNA）
更新于2025-09-11 14:15:04
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Otx2促进Müller细胞来源的视网膜干细胞向光感受器样细胞转分化
摘要： 视网膜穆勒胶质细胞具有神经源性视网膜祖细胞的潜能，可重编程为光感受器细胞等视网膜特异性细胞类型。如何促进穆勒细胞向光感受器细胞分化，为视网膜退行性疾病提供了有前景的治疗策略。本研究旨在增强大鼠穆勒细胞来源的视网膜干细胞（MC-RSCs）向光感受器样细胞的转分化，并探索其信号机制。我们将大鼠穆勒细胞去分化为MC-RSCs，分别用Otx2过表达慢病毒或对照处理。结果显示，经Otx2过表达慢病毒处理的MC-RSCs中光感受器样细胞的阳性率显著高于对照组。此外，用Crx siRNA、Nrl siRNA或GSK-3抑制剂SB-216763预处理，降低了Otx2过表达慢病毒处理的MC-RSCs中光感受器样细胞的阳性率。最后，将Otx2诱导的光感受器前体细胞注射至N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜退化模型视网膜下间隙，部分恢复了视网膜退化。结论表明，Otx2能增强MC-RSCs向光感受器样细胞的转分化，该过程与Wnt信号抑制相关。Otx2是视网膜退行性疾病基因治疗的潜在靶点。
关键词： 穆勒细胞、光感受器细胞、干细胞、Wnt信号通路、Otx2
更新于2025-09-10 09:29:36
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吲哚菁绿标记用于间充质干细胞体内移植后的光学与光声成像
摘要： 间充质干细胞（MSCs）移植在治疗多种人类疾病方面前景广阔，但需要新的无创方法来监测体内细胞命运。荧光染料吲哚菁绿（ICG）已广泛应用于医学诊断，是光学成像追踪少量细胞的成熟染料，但也可通过光声成像（PAI）可视化，其空间分辨率高于纯近红外荧光成像（NIRF）。鉴于其在临床和临床前检查中的成功应用，我们选择ICG作为PAI细胞标记剂。通过确定最佳孵育条件，制定了高效且可临床转化的MSC标记方案，在未观察到细胞毒性或表型特征改变的情况下，实现了分子的一致性细胞内摄取。体外检测显示，ICG标记的细胞悬液可通过光学和光声技术被检测到，当激发波长在680至970纳米范围内变化时，所获得的光声光谱存在一定差异。在健康小鼠后肢移植ICG标记的MSCs数天后，通过PAI和NIRF均可清晰观察到其肌内植入情况，表明该技术在以移植为重点的研究和治疗领域仍具有相当潜力。
关键词： 吲哚菁绿、近红外荧光成像、光声成像、细胞追踪、干细胞
更新于2025-09-10 09:29:36